HGF基因治療乙酸誘導(dǎo)胃潰瘍大鼠實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：闡明攜帶肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子基因的減毒沙門(mén)氏菌在大鼠胃潰瘍治療中的療效觀察和組織分布規(guī)律，為HGF在胃潰瘍基因治療中的實(shí)際應(yīng)用提供理論依據(jù)。 方法：110只Wistar大鼠，雌雄各半，平均體質(zhì)量180g±10 g。其中88只按照參考文獻(xiàn)[27]的方法制備大鼠胃潰瘍模型后，隨機(jī)分成4組：攜帶HGF基因真核表達(dá)質(zhì)粒的減毒沙門(mén)氏菌株(Typl-HGF)治療組、攜帶GFP基因真核表達(dá)質(zhì)粒的減毒沙門(mén)氏菌株(Typl-GFP)治療組、單純減

2、毒沙門(mén)氏菌株(Ty)治療組以及模型對(duì)照組，每組各22只。另22只大鼠為正常對(duì)照組。造模后第3天，將各組陽(yáng)性克隆分別接種于2 mL含卡那霉素的LB培養(yǎng)液中，震蕩過(guò)夜，次日取50 μL加入50mL含卡那霉素的LB培養(yǎng)液中，2 h后收集菌體，PBS清洗后，用10％的NaHCO3懸浮，調(diào)整細(xì)菌數(shù)為1×109 cfu/mL，每只灌胃0.2 mL，隔日一次，共3次。模型對(duì)照組和正常對(duì)照組給予同體積的0.9％氯化鈉溶液灌胃，隔日一次，共3次。Typl

3、-HGF治療組、Ty治療組、模型對(duì)照組和正常對(duì)照組灌胃3次后第1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21d各處死兩只大鼠取胃、腸、肝、脾、腎組織勻漿后用ELISA方法檢測(cè)HGF在各組織中的表達(dá)、勻漿液質(zhì)粒提取后PCR方法檢測(cè)真核表達(dá)載體在組織中的分布、并通過(guò)各組對(duì)比觀察大鼠胃組織大體和鏡下表現(xiàn)的不同來(lái)說(shuō)明HGF的治療效果；Typl-GFP治療組灌胃3次后第1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21d各處死兩只大鼠

4、取胃、腸、肝、脾、腎組織制備成冰凍切片熒光顯微鏡下觀察目的基因組織分布。 結(jié)果： 1.因?yàn)镠GF在生理情況下各組織即有，故Typl-HGF組試驗(yàn)數(shù)據(jù)是以正常對(duì)照組同時(shí)間處死大鼠的各組織勻漿為對(duì)照檢測(cè)，即生理值為0的情況下的值，也就是外源基因HGF在體內(nèi)的表達(dá)。Typl-HGF組大鼠處死后取胃、肝、脾、腎、大腸、小腸，勻漿后ELISA方法檢測(cè)結(jié)果表明在各組織中均檢測(cè)到有HGF表達(dá)，但胃、腸組織中表達(dá)較高。 2.Ty

5、pl-HGF組胃、肝、脾、腎、大腸、小腸組織勻漿后提取組織DNA后經(jīng)PCR檢測(cè)結(jié)果表明各組織均可檢測(cè)到真核表達(dá)載體的啟動(dòng)子CMV片段。 3.Typl-GFP組大鼠處死后取胃、肝、脾、腎、大腸、小腸組織制成冰凍切片在熒光顯微鏡下觀察：結(jié)果表明在肝、胃、腸觀察到較強(qiáng)的熒光，在脾、腎組織也觀察到微弱的熒光，熒光強(qiáng)度在5d到7d達(dá)到峰值，以后逐漸減弱。 4.通過(guò)對(duì)比可見(jiàn)Typl-HGF實(shí)驗(yàn)組大鼠胃組織潰瘍病變縮小，肉芽組織形成，