不同茬口當(dāng)歸根際微生物多樣性研究.pdf

1、微生物不僅使土壤有機(jī)質(zhì)的分解和合成處于相對(duì)平衡狀態(tài)，而且可礦化有機(jī)物提高土壤肥力。本研究采用PCR-DGGE技術(shù)，以生荒地為對(duì)照，系統(tǒng)研究了不同茬口(當(dāng)歸、馬鈴薯和黃芪)當(dāng)歸苗生長(zhǎng)發(fā)育及其根際細(xì)菌多樣性，旨在為篩選可替代生荒地進(jìn)行當(dāng)歸育苗的茬口土壤提供依據(jù)。研究結(jié)果表明： 1.不同茬口育苗當(dāng)歸生長(zhǎng)發(fā)育表現(xiàn)顯著差異，與生荒地相比較，黃芪茬口培育的當(dāng)歸苗健壯，根系較發(fā)達(dá)，而馬鈴薯和當(dāng)歸茬口培育的當(dāng)歸苗較弱，說(shuō)明黃芪茬口是可替代生荒地

2、進(jìn)行當(dāng)歸育苗較適宜的苗床土。 2.不同茬口當(dāng)歸成苗根際土壤肥力存在顯著差異，生荒地因養(yǎng)分基礎(chǔ)好富余營(yíng)養(yǎng)最多，而黃芪茬口由于當(dāng)歸生長(zhǎng)健壯，富余營(yíng)養(yǎng)較少，說(shuō)明采用黃芪茬口進(jìn)行當(dāng)歸育苗時(shí)應(yīng)適當(dāng)增施有機(jī)肥。土壤酸堿性也存在顯著差異，其中，馬鈴薯和當(dāng)歸茬口呈強(qiáng)堿性(pH>8.8)，不利于當(dāng)歸生長(zhǎng)發(fā)育。然而，生荒地，尤其黃芪茬口堿性較弱，有利于當(dāng)歸苗生長(zhǎng)發(fā)育，這為不同茬口當(dāng)歸生長(zhǎng)發(fā)育的差異性提供了土壤證據(jù)。 3.通過(guò)研究首次建立了當(dāng)

3、歸根際土壤微生物PCR-DGGE方法體系。通過(guò)直接從各土樣提取細(xì)菌群落基因組DNA，純化后以此DNA為模板，采用對(duì)細(xì)菌的16S rDNA基因V3區(qū)具有特異性的引物對(duì)F341GC和R518進(jìn)行PCR擴(kuò)增，將長(zhǎng)約197bp擴(kuò)增產(chǎn)物使用變性劑濃度梯度為30％～60％的10％的聚丙烯酰胺凝膠分離，最后對(duì)電泳譜圖進(jìn)行分析，得出了細(xì)菌多樣性的信息。 4.通過(guò)采用PCR-DGGE技術(shù)對(duì)不同茬口和同一茬口不同時(shí)期的當(dāng)歸根際土壤非培養(yǎng)細(xì)菌遺傳多樣

4、性分析。結(jié)果表明，細(xì)菌種群遺傳多樣性在不同土樣呈現(xiàn)顯著差異。各泳道16S rDNA的V3區(qū)條帶相似性分析顯示，育苗初期當(dāng)歸根際土壤微生物種群差異較大，但隨育苗時(shí)間的延長(zhǎng)差異性逐漸降低。DGGE對(duì)應(yīng)分析與聚類(lèi)分析顯示，生荒土和黃芪茬口當(dāng)歸根際微生物群落結(jié)構(gòu)較馬鈴薯和當(dāng)歸茬口條件下的更為接近。 5.通過(guò)細(xì)菌類(lèi)群分析，在不同茬口當(dāng)歸苗根際分離出數(shù)目不等且效果較好的電泳條帶，將主要的21個(gè)條帶測(cè)序并提交NCBI GenBank，收錄號(hào)E

5、U555004～EU555024，經(jīng)BLAST比對(duì)分析表明，來(lái)自相同地理環(huán)境的四種土樣進(jìn)行當(dāng)歸育苗后，細(xì)菌多樣性存在顯著差異，當(dāng)歸根際普遍存在大量a及Y變形菌綱(Proteobacteria)、擬桿菌門(mén)細(xì)菌(Bacteroidetes)，藍(lán)藻門(mén)(Cyanobacteria)、綠灣菌門(mén)(Chloroflexi)、厚壁菌門(mén)(Proteobacteria)等優(yōu)勢(shì)菌群，而黃芪茬口微生物種群最豐富，除上述菌群外，還存在酸桿菌門(mén)(Actinobac