缺血后處理對(duì)體外循環(huán)后心肌細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：在體外循環(huán)中如何有效地進(jìn)行心肌保護(hù)，防止或減輕心肌缺血再灌注損傷發(fā)生，仍然是心血管外科領(lǐng)域中一個(gè)極為重要而現(xiàn)實(shí)的問(wèn)題。盡管體外循環(huán)時(shí)采用各種心肌保護(hù)措施，仍不能完全防止心肌缺血再灌注損傷。以往對(duì)體外循環(huán)中心肌保護(hù)的研究大多集中在心臟停搏期間如何減輕缺血，缺氧引起的損傷，而且也多局限于對(duì)心肌停搏液溫度，成分的改變或給藥方法，途徑的改進(jìn)等方面。近年來(lái)一些學(xué)者提出了內(nèi)源性心肌保護(hù)的概念：缺血預(yù)處理及缺血后處理，為心肌缺血再灌注損傷的預(yù)防

2、開(kāi)拓了一個(gè)新的研究領(lǐng)域。本課題擬在犬體外循環(huán)模型上，研究缺血后處理對(duì)體外循環(huán)術(shù)后心肌細(xì)胞凋亡的影響，探討再灌注損傷補(bǔ)救激酶(RISK)信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)中Akt，ERK在心肌細(xì)胞凋亡過(guò)程調(diào)控機(jī)制中的作用，研究Bax/Bcl-2基因蛋白表達(dá)的差異，并比較缺血預(yù)處理與缺血后處理兩者作用機(jī)制及效果的異同。本課題分兩部分：第一部分：體外循環(huán)模型的建立及體外循環(huán)對(duì)心肌細(xì)胞凋亡的影響；第二部分：缺血后處理對(duì)心肌細(xì)胞凋亡及RISK系統(tǒng)，Bcl-2/Bax基

3、因表達(dá)的影響 方法：6只試驗(yàn)犬模擬人體外循環(huán)心臟直視手術(shù)的方法，采取不同的阻斷時(shí)間以建立穩(wěn)定的試驗(yàn)犬體外循環(huán)模型，通過(guò)免疫組化及Western-blot法檢測(cè)RISK系統(tǒng)中Akt，ERK的變化，通過(guò)TUNEL法檢測(cè)術(shù)前，阻斷循環(huán)中及開(kāi)放循環(huán)再灌注后心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)的變化。在建立穩(wěn)定的試驗(yàn)犬體外循環(huán)模型基礎(chǔ)上，20只試驗(yàn)犬隨機(jī)分為對(duì)照組，缺血預(yù)處理組、缺血后處理組及缺血預(yù)處理+后處理組。(1)對(duì)照組：主動(dòng)脈阻斷60min，再灌注9

4、0min。(2)缺血預(yù)處理組：阻斷主動(dòng)脈之前，給予2min阻斷/3min再灌注2個(gè)循環(huán)。(3)缺血后處理組：開(kāi)放主動(dòng)脈之前，給予開(kāi)放30s/再阻斷30s三個(gè)循環(huán)。(4)缺血預(yù)處理+后處理組：在阻斷循環(huán)前后給予(2)、(3)組的處理。分別在開(kāi)始體外循環(huán)之前，阻斷循環(huán)過(guò)程中及開(kāi)放循環(huán)再灌注90min時(shí)留取心肌標(biāo)本，采用免疫組化及Western-blot法檢測(cè)犬心肌細(xì)胞中Akt，ERK，Bcl-2及Bax蛋白的表達(dá)。采用TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)

5、胞的凋亡指數(shù)。 結(jié)果：采用阻斷循環(huán)60min，再灌注90min可建立穩(wěn)定的試驗(yàn)犬體外循環(huán)模型，并能滿足試驗(yàn)要求。與術(shù)前相比，開(kāi)放循環(huán)再灌注后試驗(yàn)犬心肌細(xì)胞內(nèi)P-Akt，P-ERK蛋白明顯增多(p<0.05)。開(kāi)放循環(huán)再灌注后心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)較阻斷循環(huán)前，阻斷循環(huán)中明顯增多。與對(duì)照組相比，缺血預(yù)處理組、缺血后處理組及缺血預(yù)處理+后處理組體外循環(huán)后犬心肌細(xì)胞內(nèi)P-Akt，P-ERK，Bcl-2蛋白表達(dá)升高，Bax下降(p<0.05)

6、。心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)降低(p<0.05)。但三組之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：1.體外循環(huán)可引起心肌細(xì)胞凋亡發(fā)生，而其引起的RISK激酶上調(diào)尚不足以完全抑制心肌細(xì)胞缺血再灌注損傷導(dǎo)致的心肌細(xì)胞凋亡發(fā)生。2.缺血后處理作為一種內(nèi)源性心肌保護(hù)性因素，其心肌保護(hù)作用可能與RISK通路有關(guān)，從而影響凋亡相關(guān)基因Bcl-2/Bax的表達(dá)，減少體外循環(huán)中再灌注心肌細(xì)胞凋亡，起到心肌保護(hù)作用。3.缺血后處理與缺血預(yù)處理具有相同的抗心肌細(xì)胞凋亡作