紅曲拮抗高脂膳食誘導大鼠非酒精性脂肪肝分子機制研究.pdf

1、非酒精性脂肪肝（non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）僅次于病毒性肝炎的第二大肝病，已經(jīng)成為我國常見的慢性肝病之一，其發(fā)病率大約為14～20%，嚴重危害人民生活健康。NAFLD以彌漫性肝細胞大泡性脂肪變?yōu)橹饕卣鞯呐R床病理綜合征，包括單純性脂肪肝及其演變的脂肪性肝炎（NASH）和肝硬化。研究發(fā)現(xiàn)遺傳易感性、胰島素抵抗、腸源性內(nèi)毒素血癥以及PPARα與其發(fā)病關系密切。其中胰島素抵抗是關鍵的始動因素

2、，腸源性內(nèi)毒素血癥以及PPARα的表達下調(diào)作為“二次打擊”，最終造成脂肪在肝臟大量蓄積出現(xiàn)脂肪肝的病理改變。 祖國醫(yī)學雖無“脂肪肝”的病名，《內(nèi)經(jīng)》中有“肝滿”、“肝脹”、“脅痛”等記載，符合脂肪肝的臨床表現(xiàn)。其病位在肝，與膽、脾、胃、腎均有關。多因過食肥甘，或飲酒過度，或感受濕熱疫毒，或情志失調(diào)，或久病體虛，導致痰濕瘀阻互結(jié)，痹阻肝臟脈絡而成。紅曲性味甘、溫、無毒，歸肝、脾胃、大腸經(jīng)，具有健脾消食、活血化淤之功效；現(xiàn)代藥理研究

3、發(fā)現(xiàn)其有效成份之一的洛伐他汀，具有較為理想的抗炎、降膽固醇的功效，已在臨床廣泛利用。因此，本課題組推測，紅曲可能具有較好的抗NAFLD的效應，對紅曲抗NAFLD的分子機制深入研究，是中藥創(chuàng)新的切入點。 本項目在中醫(yī)藥理論指導下，結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學研究進展，通過高脂飲食誘導胰島素抵抗NAFLD大鼠模型，繼而予以不同劑量紅曲干預8周，以絞股藍為陽性對照組，采用HE染色、全自動生化分析、胰島素-血糖鉗夾、RT-PCR、Western-blo

4、t、ELISA等實驗技術檢測各組大鼠血脂、肝臟生化、胰島素抵抗以及TNF-α、IL-6、IL-10、PPARα等指標的變化，探討紅曲治療NAFLD的效應及其作用機制，為提高中醫(yī)藥防治水平提供實驗依據(jù)。 目的： 觀察紅曲對胰島素抵抗，肝臟生化、血脂改變以及TNF-α、IL-6、IL-10、PPARα等指標的影響，探討胰島素抵抗、腸源性內(nèi)毒素血癥以及過氧化物增殖激活受體在大鼠NAFLD發(fā)病中的作用及紅曲拮抗NAFLD的分子機

5、制。 方法： 48只SD大鼠，雌雄各半，適應性喂養(yǎng)1周后，按體重隨機分為6組，正常組、模型組、絞股藍組、紅曲低劑量組、紅曲中劑量組、紅曲高劑量組，每組8只。正常組予普通飼料，同步飼養(yǎng)8周；其余各組予高脂飼養(yǎng)喂養(yǎng)，并分別予等劑量生理鹽水、絞股藍水溶液、低、中、高劑量紅曲水溶液灌胃，連續(xù)8周。第9周，處死所有大鼠，取肝臟及腹主動脈血備用。 HE染色、光鏡下對各組大鼠肝臟組織病理學評分，從形態(tài)學上分析NAFLD大鼠及

6、紅曲干預后肝臟組織結(jié)構(gòu)的變化；全自動生化分析儀分析血清ALT、AST、及血脂變化；放免法檢測肝纖四項；正常葡萄糖-高胰島素鉗夾技術評估胰島素抵抗變化，以觀察紅曲改善胰島素抵抗的效應；ELSIA及RT-PCR技術檢測各組大鼠TNF-α、IL-6、IL-10水平變化，分析紅曲對TNF-α、IL-6、IL-10的影響，以觀察紅曲對上述細胞因子的調(diào)控機制；Western-blot、RT-PCR技術檢測各組大鼠肝臟PPARα mRNA和蛋白水平變

7、化，從蛋白表達水平和從基因轉(zhuǎn)錄水平分析NAFLD大鼠肝臟PPARα的情況及紅曲對其進行治療后的肝臟PPARα的影響。 統(tǒng)計學處理：計量資料用平均值±標準差（x±s）表示，數(shù)據(jù)處理采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件包進行單因素方差分析（One-way ANOVA）；計數(shù)資料采用秩和檢驗。P<0.05有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果： 1.紅曲對NAFLD大鼠的癥狀、體征的影響 2.紅曲對NAFLD大鼠肝組織形態(tài)學的影響

8、 3.紅曲對NAFLD大鼠肝功能、血脂的影響 4.紅曲對NAFLD大鼠肝纖維化的影響 5.紅曲對NAFLD大鼠胰島素抵抗的影響 6.紅曲對NAFLD大鼠腸源性內(nèi)毒素血癥的影響 7.紅曲對NAFLD大鼠肝臟PPARα的影響 結(jié)論： 1連續(xù)8周高脂飲食成功建立了大鼠脂肪肝胰島素抵抗模型。該模型的病理特征為肝細胞呈大泡性脂肪變性，伴小葉內(nèi)炎癥細胞浸潤、一定程度的肝纖維化和線粒體結(jié)構(gòu)的異常；代謝

9、特征為胰島素抵抗、高胰島素血癥、高脂血癥、和血清轉(zhuǎn)氨酶升高。該模型與人類肥胖所致NAFLD的病理和代謝改變極其相似，造模簡單、模型成功率高，為研究NAFLD的發(fā)病機制，篩選有效的防治藥物提供了良好的工具。 2紅曲能有效的拮抗大鼠NAFLD的進程，其作用機制為： ①紅曲能夠改善NAFLD模型大鼠的一般情況：如改善大鼠模型的精神狀況、耗食量、以及營養(yǎng)狀況。 ②肝臟病理學觀察表明紅曲能改善肝臟脂肪變性，減少肝細胞壞死以

10、及炎性細胞浸潤。 ③紅曲降低NAFLD模型大鼠血清ALT、AST含量，但無明顯降低血甘油三脂的效應。提示紅曲能有效減輕炎癥反應，保護肝細胞，減輕脂肪性肝炎改變。 ④紅曲降低NAFLD模型大鼠胰島素抵抗及高胰島素血癥，增加胰島素敏感性，從而阻斷“初次打擊”。 ⑤紅曲降低NAFLD模型大鼠組織中TNF-α的表達，改善腸原性內(nèi)毒素血癥，從而抑制選擇性胰島素抵抗，阻斷“二次打擊”，抑制脂肪肝的發(fā)生。 ⑥紅曲能升高