前列腺癌IGF-Ⅱ基因印跡和免疫功能狀態(tài)的研究.pdf

1、前列腺癌為老年病，隨著壽命的延長(zhǎng)、飲食結(jié)構(gòu)的改變、人民保健意識(shí)的提高和診斷技術(shù)的發(fā)展，我國(guó)前列腺癌發(fā)病率增長(zhǎng)極為迅速。而且國(guó)內(nèi)的前列腺癌患者大部分為中晚期，內(nèi)分泌治療療效欠佳，80％的轉(zhuǎn)移性患者會(huì)在12～18個(gè)月后轉(zhuǎn)為激素難治性前列腺癌，病情繼續(xù)進(jìn)展，是患者死亡的主要原因。尋找與前列腺癌惡性發(fā)展相關(guān)的因素，進(jìn)一步篩選難治性前列腺癌的治療靶點(diǎn)，是前列腺癌研究中的重點(diǎn)和熱點(diǎn)。 與前列腺癌發(fā)生及進(jìn)展惡化的相關(guān)因素較多，國(guó)外學(xué)者的研究表

2、明胰島素樣生長(zhǎng)因子Ⅱ(Insulin-1ikegrowthfactorⅡ，IGF-Ⅱ)的過(guò)表達(dá)與前列腺癌細(xì)胞株的致瘤性和惡性進(jìn)展相關(guān)。IGF-Ⅱ的表達(dá)受到基因印跡的調(diào)控；基因組印跡是近年發(fā)現(xiàn)的一種不遵從孟德?tīng)柖?、依靠單親傳遞的遺傳學(xué)現(xiàn)象。基因印跡并沒(méi)有改變DNA的核酸序列，而是通過(guò)親緣特異性的表遺傳修飾，使一對(duì)等位基因呈單等位基因表達(dá)或差異表達(dá)——即基因的表達(dá)取決于該基因源自父親或母親。如果特異性親源優(yōu)先表達(dá)基因缺失，包括正常沉默等位

3、基因異常表達(dá)，從而導(dǎo)致雙等位基因表達(dá)，或使正常表達(dá)的等位基因沉默，從而導(dǎo)致后天基因位點(diǎn)沉默，則這種表遺傳改變稱為印跡丟失。正常情況下IGF-Ⅱ來(lái)自父源的等位基因被轉(zhuǎn)錄，而母源的等位基因由于甲基化修飾而發(fā)生基因沉默，IGF-Ⅱ維持適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)錄和表達(dá)水平。從腫瘤發(fā)生的角度看，IGF-Ⅱ基因相當(dāng)于功能上的單倍體，僅需1次突變就使該基因失活或活化，增加了腫瘤的易感性。目前已知許多印跡基因具有原癌或抑癌基因的功能，在wilms瘤、肝癌、肺癌、腎癌、

4、胃癌和腸癌等腫瘤中也發(fā)現(xiàn)了IGF-Ⅱ的印跡丟失，但是關(guān)于前列腺癌組織中IGF-Ⅱ的印跡狀態(tài)以及印跡丟失與疾病進(jìn)展的關(guān)系，尚未見(jiàn)報(bào)道，本文第一部分進(jìn)行了這方面的研究。 機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)腫瘤的應(yīng)答機(jī)制十分復(fù)雜，涉及多種免疫細(xì)胞及其分泌的產(chǎn)物，包括T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞介導(dǎo)的特異或非特異的細(xì)胞免疫、體液免疫以及補(bǔ)體、細(xì)胞因子的抗腫瘤作用，它們相互影響，相互調(diào)節(jié)，共同完成免疫監(jiān)視功能。但是盡管機(jī)體有如此多樣的抗腫瘤免疫效應(yīng)，腫瘤仍

5、可在某些個(gè)體內(nèi)發(fā)生和發(fā)展，細(xì)胞因子介導(dǎo)的免疫抑制是其中的重要因素之一。同時(shí)隨著腫瘤的進(jìn)展，反過(guò)來(lái)又可能進(jìn)一步抑制機(jī)體的免疫功能。本文第二部分通過(guò)檢測(cè)前列腺癌患者體內(nèi)部分免疫細(xì)胞和免疫因子的數(shù)量，探索這些患者是否存在細(xì)胞因子的分泌異常和細(xì)胞免疫功能低下，以便于今后在系統(tǒng)治療前綜合評(píng)定患者的免疫功能狀態(tài)，采取個(gè)體化的治療方案。 第一部分前列腺癌癌組織中IGF-Ⅱ的基因印跡狀態(tài)及臨床意義方法應(yīng)用限制性酶切片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析法檢測(cè)41例

6、前列腺癌、27例良性前列腺增生和13例正常前列腺組織中的ⅡGF-Ⅱ基因印跡狀態(tài)，分析IGF-Ⅱ基因印跡狀態(tài)與前列腺癌臨床資料和疾病進(jìn)展的關(guān)系。 結(jié)果 (1)前列腺癌、良性前列腺增生和正常前列腺組織中IGF-Ⅱ雜合子基因型分別為70.7％(29/41)、55.5％(15/27)和61.5％(8/13)，無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。58.6％(17/29)的前列腺癌組織中發(fā)生了IGF-Ⅱ的印跡丟失，高于前列腺增生組織(13

7、.3％，P＜0.05)和正常前列腺組織(12.5％，P＜0.05)中的印跡丟失率。IGF-Ⅱ基因印跡狀態(tài)與前列腺癌患者的年齡無(wú)明顯關(guān)系(P=0.199)。 (2)IGF-Ⅱ基因印跡狀態(tài)與前列腺癌患者內(nèi)分泌治療前的血PSA數(shù)值無(wú)明顯關(guān)系(P=0.616)。 (3)IGF-Ⅱ基因印跡狀態(tài)與前列腺癌患者內(nèi)分泌治療前的骨轉(zhuǎn)移病灶無(wú)明顯關(guān)系(P=0.669)。 (4)IGF-Ⅱ基因印跡狀態(tài)與前列腺癌細(xì)胞的分化程度無(wú)明顯關(guān)系

8、(P=1.000)。 (5)經(jīng)內(nèi)分泌治療后，前列腺癌IGF-Ⅱ基因印跡丟失組患者的1年無(wú)疾病進(jìn)展生存率為77％，而IGF-Ⅱ基因印跡狀態(tài)正常組患者的1年無(wú)疾病進(jìn)展生存率為100％，兩組生存率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.038)。 結(jié)論晚期前列腺癌組織中IGF-Ⅱ基因印跡丟失發(fā)生率明顯增高，并且發(fā)生印跡丟失的病例經(jīng)內(nèi)分泌治療后更易進(jìn)展。提示IGF-Ⅱ基因印跡丟失可能介入了雄激素非依賴性前列腺癌的形成。 第二部分前列腺

9、癌患者免疫功能狀態(tài)的評(píng)價(jià)方法研究對(duì)象為2005年5月～2006年3月中山大學(xué)腫瘤防治中心收治的初診前列腺癌34例和良性前列腺增生22例，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)、B細(xì)胞(CD19+)和NK細(xì)胞(CD56+)的含量，同時(shí)檢測(cè)Th1/Th2細(xì)胞因子的含量，包括IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF、IFN-γ。統(tǒng)計(jì)分析這些指標(biāo)與前列腺癌患者臨床和病理資料的相關(guān)性

10、。 結(jié)果 (1)前列腺癌患者外周血CD3+、CD4+和CD8+數(shù)量以及CD4+/CD8+比例與正常值比較沒(méi)有明顯的變化，50％的患者B細(xì)胞比例低于正常參考值，29％的患者NK細(xì)胞比例高于正常參考值。與對(duì)照組比較，上述指標(biāo)都無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。CD3+T細(xì)胞與年齡呈負(fù)相關(guān)(r=-0.493，P=0.004)，NK細(xì)胞與年齡呈正相關(guān)(r=0.478，P=0.006)。上述免疫細(xì)胞的數(shù)量不受患者治療前的血PSA、腫瘤

11、分期分級(jí)和骨轉(zhuǎn)移的影響(P＞0.05)。 (2)前列腺癌患者外周血中IL-6的含量與前列腺癌臨床分期(r=0.323，P=0.047)和癌細(xì)胞分級(jí)(r=0.324，P=0.046)呈正相關(guān)；IL-10的濃度與患者治療前的血PSA呈正相關(guān)(r=0.394，P=0.038)。 (3)前列腺癌骨轉(zhuǎn)移患者的體內(nèi)IL-2濃度(1.64±2.14vs11.57±10.42，P=0.001)和IFN-γ濃度(4.35±2.62vs16

12、.74±20.88，P=0.026)較無(wú)骨轉(zhuǎn)移者低，而IL-6在骨轉(zhuǎn)移患者的體內(nèi)較高(7.38±6.59vs3.90±1.42，P=0.049)。 (4)IL-2的濃度與CD4+T細(xì)胞(r=0.351，P=0.027)和CD8+T細(xì)胞數(shù)量(r=0.061，P=0.042)呈正相關(guān)，IL-6濃度與NK細(xì)胞呈負(fù)相關(guān)(r=-0.091，P=0.040)，IL-10濃度與NK細(xì)胞呈負(fù)相關(guān)(r=-0.237，P=0.049)，IFN-γ濃

13、度與CD4+T細(xì)胞呈正相關(guān)(r=0.288，P=0.045)。 (5)IL-2/IL-6與前列腺癌患者治療前的血PSA(r=-0.235，P=0.012)、臨床分期(r=-0.389，P=0.047)呈負(fù)相關(guān)。IL-2/IL-10與治療前的血PSA(r=-0.010，P=0.042)和臨床分期(r=-0.315，P=0.037)呈負(fù)相關(guān)。IFN-γ/IL-6(r=-0.133，P=0.049)、TNF/IL-6(r=-0.043

14、，P=0.026)與臨床分期呈負(fù)相關(guān)。 (6)骨轉(zhuǎn)移的前列腺癌與無(wú)骨轉(zhuǎn)移者比較，IL-2/IL-4(0.37±0.47vs1.44±0.90，P=0.003)、IL-2/IL-6(0.24±0.34vs1.39±1.46，P=0.020)、IL-2/IL-10(0.22±0.32vs1.47±1.45，P=0.013)和IFN-γ/IL-10(0.63±0.42vs1.98±2.21，P=0.028)都明顯降低。 (7)

15、31例患者行全雄激素阻斷治療3個(gè)月后，20例PSA降至4μg/l以下，11例仍高于4μg/l。兩組患者的治療前PSA沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.185)；但治療后PSA降至4μg/l以下的患者體內(nèi)IL-6水平(7.29±5.80vs32.69±25.46，P=0.032)和IL-2/IL-6(0.38±0.35vs1.28±1.64，P=0.037)明顯降低。 結(jié)論前列腺癌患者體內(nèi)Th1/Th2細(xì)胞因子失衡與前列腺癌分期、癌細(xì)胞分化