慢性復(fù)合應(yīng)激對大鼠學(xué)習(xí)記憶損傷及其機(jī)制的初步研究.pdf

1、應(yīng)激是指機(jī)體在受到各種因素刺激時(shí)所出現(xiàn)的非特異性的全身反應(yīng)。應(yīng)激源可以刺激機(jī)體引發(fā)應(yīng)激反應(yīng)，釋放激素和其他細(xì)胞因子，促進(jìn)機(jī)體適應(yīng)刺激；然而，當(dāng)應(yīng)激過度或機(jī)體不能適應(yīng)調(diào)節(jié)時(shí)，則會(huì)產(chǎn)生有害的病理生理學(xué)改變。大腦是應(yīng)激作用的主要靶器官之一，動(dòng)物研究已發(fā)現(xiàn)應(yīng)激可以誘導(dǎo)腦部結(jié)構(gòu)和功能的改變，如神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)的改變，動(dòng)物認(rèn)知、行為的改變等。現(xiàn)代自然、社會(huì)環(huán)境中，個(gè)體與各種應(yīng)激因素相接觸，如寒冷、酷熱、潮濕等外部環(huán)境理化因素；營養(yǎng)缺乏、感覺剝奪等個(gè)體內(nèi)

2、環(huán)境因素；還有如競爭失敗、喪失親人等心理社會(huì)環(huán)境因素。因此研究慢性復(fù)合應(yīng)激對機(jī)體的影響尤其是對心理和認(rèn)知功能的影響則顯得極為重要。
　　以往研究表明：慢性復(fù)合應(yīng)激能夠?qū)C(jī)體多系統(tǒng)尤其是中樞神經(jīng)系統(tǒng)（central never system,CNS）產(chǎn)生損傷作用，其可能機(jī)制包括影響下丘腦-垂體-腎上腺軸（hypothalamic-pituitary-adrenal axis,HPA）、影響谷氨酸（glutamine,Glu）及其受體

3、的釋放、影響突觸結(jié)構(gòu)及其可塑性等。
　　小膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一個(gè)重要的免疫駐留細(xì)胞，已有文獻(xiàn)報(bào)道持續(xù)活化的小膠質(zhì)細(xì)胞能夠產(chǎn)生大量的炎性因子從而對神經(jīng)元的代謝、關(guān)鍵蛋白的表達(dá)以及神經(jīng)元的存活產(chǎn)生影響。研究顯示內(nèi)外部環(huán)境的微小改變即能刺激并導(dǎo)致小膠質(zhì)細(xì)胞活化從而對中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生影響?；诖宋覀兺茰y，小膠質(zhì)細(xì)胞活化可能也在慢性復(fù)合應(yīng)激致學(xué)習(xí)記憶損傷中發(fā)揮重要作用。
　　目的：
　　通過建立大鼠慢性復(fù)合應(yīng)激動(dòng)物模型，研

4、究慢性復(fù)合應(yīng)激對大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響及其機(jī)制，重點(diǎn)闡明小膠質(zhì)細(xì)胞活化在慢性復(fù)合應(yīng)激所致學(xué)習(xí)記憶損傷中的作用和分子調(diào)控機(jī)制，為慢性復(fù)合應(yīng)激損傷的防治提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1．建立慢性復(fù)合應(yīng)激動(dòng)物模型：40只斷乳的SD雄性大鼠隨機(jī)分為四組：對照組（Con）；慢性復(fù)合應(yīng)激組（MStress）（禁食/禁水，晝夜顛倒，鼠籠傾斜45度，單籠孤獨(dú)飼養(yǎng)，限制活動(dòng)，4℃冷應(yīng)激，20℃強(qiáng)迫游泳）；對照給藥組（Con+Mino）

5、；慢性復(fù)合應(yīng)激給藥組（MStress+Mino）。
　　2．水迷宮檢測大鼠的空間記憶能力，膜片鉗技術(shù)檢測大鼠海馬離體腦片LTP誘導(dǎo)水平。
　　3．免疫組織化學(xué)染色檢測小膠質(zhì)細(xì)胞活化狀態(tài)；ELISA法檢測細(xì)胞因子表達(dá)；TUNEL染色檢測海馬部位神經(jīng)元細(xì)胞凋亡情況；Western Blot檢測Erk1/2、GluR1等蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1．慢性復(fù)合應(yīng)激能夠誘導(dǎo)學(xué)習(xí)記憶能力降低
　　通過給予動(dòng)物7種

6、不同的應(yīng)激刺激建立大鼠慢性復(fù)合應(yīng)激的動(dòng)物模型，隱蔽平臺(tái)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，慢性復(fù)合應(yīng)激組大鼠到達(dá)平臺(tái)的潛伏期和對照組相比顯著延長（P<0.05）；空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，慢性復(fù)合應(yīng)激組大鼠在目的象限的探索時(shí)間和對照組相比顯著縮短（P<0.05）；膜片鉗技術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)慢性復(fù)合應(yīng)激組大鼠海馬離體腦片LTP誘導(dǎo)水平顯著低于正常對照組（P<0.05）。
　　2．慢性復(fù)合應(yīng)激能夠誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞活化和海馬神經(jīng)元細(xì)胞凋亡
　　免疫組織熒光化學(xué)法觀察

7、發(fā)現(xiàn)，慢性復(fù)合應(yīng)激組大鼠海馬部位部分小膠質(zhì)細(xì)胞胞體變粗，突觸減少，呈阿米巴樣，即活化狀態(tài)，海馬神經(jīng)元細(xì)胞凋亡增加。統(tǒng)計(jì)結(jié)果發(fā)現(xiàn)慢性復(fù)合應(yīng)激組小膠質(zhì)細(xì)胞活化數(shù)量和海馬神經(jīng)元細(xì)胞凋亡數(shù)量與對照組相比顯著增加（P<0.05）。ELISA法檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)慢性復(fù)合應(yīng)激組炎性因子TNF-α、IL-1β表達(dá)水平顯著高于對照組（P<0.01）。
　　3．慢性復(fù)合應(yīng)激能夠誘導(dǎo)海馬p-Erk1/2、GluR1表達(dá)水平的降低
　　Western B

8、lot檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，慢性復(fù)合應(yīng)激可導(dǎo)致大鼠海馬p-Erk1/2表達(dá)水平降低，GluR1表達(dá)降低（P<0.05）。
　　4.抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化能夠降低其相關(guān)炎性因子的表達(dá)并逆轉(zhuǎn)海馬p-Erk1/2、GluR1表達(dá)的改變。
　　給予米諾環(huán)素干預(yù)后，小膠質(zhì)細(xì)胞活化水平受到顯著抑制（P<0.05），其炎性因子TNF-α、IL-1β表達(dá)水平也顯著降低；經(jīng)Western Blot檢測發(fā)現(xiàn)p-Erk1/2、GluR1表達(dá)水平均顯著恢復(fù)（P

9、<0.05）。
　　5.抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化能夠保護(hù)海馬神經(jīng)元細(xì)胞，并提高海馬LTP誘導(dǎo)水平及大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。
　　給予米諾環(huán)素干預(yù)后，慢性復(fù)合應(yīng)激大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞凋亡數(shù)量顯著減少；海馬離體腦片LTP誘導(dǎo)水平較單純慢性復(fù)合應(yīng)激組顯著升高（P<0.05）；水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測大鼠空間記憶能力顯著高于慢性復(fù)合應(yīng)激組（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、慢性復(fù)合應(yīng)激能夠?qū)е麓笫蠛ｑR神經(jīng)元凋亡及突觸可塑性改變，并導(dǎo)致學(xué)習(xí)