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文檔簡介
1、目的： 應(yīng)用相對的兩對引物-聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(PCR-CTPP)和多重等位基因特異聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(MAS-PCR)，建立可簡單、準(zhǔn)確、快速、經(jīng)濟、大規(guī)模地檢測代謝酶基因多態(tài)性的方法。探討細胞色素P4501A1(CYP1A1)、依賴還原型輔酶Ⅰ/Ⅱ醌氧化還原酶1(NQO1)、環(huán)氧化物水解酶(EPHX1)和谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶(GSTs)基因多態(tài)性與膀胱癌易感性的關(guān)系，以期為膀胱癌的早期診斷及防治提供理論依據(jù)。 方法：
2、采用病例對照研究方法，病例組選取2007年1月～2008年3月在溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院住院手術(shù)的膀胱腫瘤患者，均為首次發(fā)病入院，未經(jīng)化療、放療，并且無任何其他腫瘤病史，術(shù)后病理診斷均為膀胱移行細胞癌，共99例。對照組選取同期溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院健康體檢者，共100例，既往均無腫瘤史、癌前病變史，家族中無膀胱腫瘤病史。兩組均為溫州地區(qū)漢族人群，年齡、性別和吸煙狀況構(gòu)成均衡，均無職業(yè)暴露，具有可比性。使用DNA提取試劑盒提取外周血白細胞D
3、NA，針對CYP1A1 A4889G、NQO1 C609T、EPHX1 A416G和GSTP1 A313G基因多態(tài)性設(shè)計PCR-CTPP引物，針對GSTM1、GSTT1基因多態(tài)性設(shè)計MAS-PCR引物，優(yōu)化PCR反應(yīng)條件，凝膠電泳成像系統(tǒng)成像分析、判定基因型，DNA測序及重復(fù)檢測方法驗證基因型準(zhǔn)確性。采用x2檢驗、二分類非條件Logistic回歸分析、x2分割檢驗等統(tǒng)計方法分析數(shù)據(jù)，明確上述基因多態(tài)性與膀胱癌易感性的關(guān)系。 結(jié)果
4、： 1.成功建立了CYP1A1 A4889G、NQO1 C609T、EPHX1 A416G、GSTM1、GSTT1和GSTP1 A313G基因型多態(tài)性的PCR-CTPP和MAS-PCR檢測方法。隨機選取的樣本，基因型DNA測序驗證準(zhǔn)確率達100％，重復(fù)檢測驗證準(zhǔn)確率亦達100％。CYP1A1 A4889G、NQO1 C609T、EPHX1 A416G和GSTP1 A313G的基因型在對照組中的分布均符合Hardy-Weinber
5、g平衡(P>0.05)。 2.NQO1 C609T和GSTM1基因型分布頻率在膀胱癌組和對照組之間的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，攜帶NQO1609TT基因型的個體罹患膀胱癌的風(fēng)險是攜帶609CC基因型個體的2.448倍(95％CI為1.125～5.326)，攜帶GSTM1(-)基因型的個體罹患膀胱癌的風(fēng)險是攜帶GSTM1(+)基因型個體的2.041倍(95％CI為1.145～3.638)。CYP1A1 A4889G、EP
6、HX1 A416G、GSTT1和GSTP1 A313G基因型分布頻率在兩組間的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。 3.NQO1 C609T和 EPHX1 A416G、NQO1 C609T和GSTM1、NQO1 C609T和GSTP1 A313G與EPHX1 A416G和GSTM1高、低?；蛐烷g的聯(lián)合頻率在病例組和對照組之間的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，其兩高?；蛐偷膫€體罹患膀胱癌的風(fēng)險是同時攜帶兩低危基因型個體的4
7、.181倍(95％CI為1.465～11.934)、16.684倍(95％CI為3.533～78.787)、3.767倍(95％CI為1.128～12.582)和2.783倍(95％CI為0.937～8.261)。 4.CYP1A1 A4889G、NQO1 C609T、EPHX1 A416G、GSTM1、GSTT1和GSTP1A313G基因型分布頻率在膀胱癌病理分級之間和臨床分期之間的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
8、 結(jié)論： 1.PCR-CTPP和MAS-PCR檢測方法為可簡單、準(zhǔn)確、快速、經(jīng)濟、大規(guī)模地檢測代謝酶基因多態(tài)性的較好方法。 2.NQO1 C609T和GSTM1基因多態(tài)性可能與膀胱癌的易感性相關(guān)，攜帶NQO1609TT和GSTM1(-)基因型的人群易患膀胱癌。 3.NQO1 C609T和EPHX1 A416G、NQO1 C609T和GSTM1、NQO1 C609T和GSTP1 A313G與EPHX1 A416G和
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