整合素α5β1及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在慢性乙型肝炎肝纖維化中的作用.pdf

1、目的：肝纖維化是以肝臟細(xì)胞外基質(zhì)(extra cellularmatrix，ECM)合成增多、降解相對(duì)不足而過量沉積為特征，是各種慢性肝病向肝硬化發(fā)展的必經(jīng)病理通路，是影響諸多肝病預(yù)后、轉(zhuǎn)歸的關(guān)鍵。肝纖維化的形成涉及多種細(xì)胞、細(xì)胞因子及ECM的變化，各種因素間相互交錯(cuò)、相互影響，而細(xì)胞因子在肝纖維化形成中的作用舉足輕重。其確切的發(fā)病機(jī)制不甚明了。肝星狀細(xì)胞(hepatic satellite cell，HSC)的活化增殖是肝纖維化形成的

2、中心環(huán)節(jié)，α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(smooth muscle actin，α-SMA)是HSC活化的標(biāo)志，HSC與ECM之間相互作用主要是通過信號(hào)分子黏著斑激酶(focaladhesion kinase，F(xiàn)AK)的介導(dǎo)。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(transforminggrowth factor，TGF-β1)是作用明確的早期致纖維化因子，可增高FAK的活性。纖維連結(jié)蛋白(fibronection，F(xiàn)N)是ECM的主要成分，與特異的整合素相互作用傳遞信

3、號(hào)，調(diào)控ECM的合成。整合素(integrin)為介導(dǎo)細(xì)胞與ECM間黏附作用的黏附分子之一，是ECM的主要受體。與肝纖維化密切相關(guān)的是整合素α5 β1、α6 β1和α1 β1等。關(guān)于整合素α5 β1是如何通過FAK介導(dǎo)FN與HSC之間的作用以及與肝纖維化進(jìn)展的關(guān)系的研究甚少。本課題采用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)，檢測(cè)慢性乙型肝炎患者肝組織中整合素α5 β1、FAK、FN、α-SMA、TGF-β1的表達(dá)分布和程度，分析其在肝纖維化中的作用和關(guān)系

4、，探討整合素α5β1及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在肝纖維化形成中的作用及其機(jī)制，為今后防治肝纖維化提供一條新的途徑和理論依據(jù)。方法：1病例選擇：選取石家莊市第五醫(yī)院2006年1月-2007年7月住院的慢性乙型肝炎患者100人。其中男性56人，女性44人，年齡18-65歲(平均41.2歲)；排除甲、丙、丁、戊型肝炎、酒精性肝病、脂肪肝及自身免疫性肝病。2、研究方法：患者均行肝組織穿刺，標(biāo)本長(zhǎng)度≥1.5厘米，即刻置入10％緩沖中性甲醛液固定，24小時(shí)后

5、石蠟包埋，連續(xù)切片后進(jìn)行①蘇木精-伊紅(HE)和Masson染色，鏡下觀察進(jìn)行肝纖維化分期。②采用S-P免疫組化染色觀察肝組織整合素α5β1、FAK、FN、α-SMA、TGF-β1的表達(dá)分布，并采用HPIAS-1000型多媒體真彩色病理圖文分析系統(tǒng)進(jìn)行半定量測(cè)定。其含量以表達(dá)陽性區(qū)域占全視野面積的百分比(面密度)平均數(shù)表示。所有患者肝穿刺前抽取空腹不抗凝靜脈血6ml，分別行乙肝五項(xiàng)、肝功能及肝纖四項(xiàng)(PCⅢ、CⅣ、HA、LN)檢查。3、

6、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS13.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)量資料采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。同一指標(biāo)的組間比較采用方差分析，分析前行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊時(shí)用SNK法(q檢驗(yàn))，方差不齊時(shí)用Yamhane's法(q'檢驗(yàn))，兩指標(biāo)之間的相關(guān)性采用直線相關(guān)性分析。p<0.05表示有顯著性差異。 結(jié)果：1肝組織病理分期：按2000年西安全國(guó)病毒性肝炎學(xué)術(shù)會(huì)議制定的《病毒性肝炎防治方案》診斷標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)S020例、S1 21例、S2 22例、

7、S3 19例和S4 18例。2肝組織整合素α5β1含量隨著纖維化程度的加重而逐漸增加(p<0.05)。S0在肝竇內(nèi)皮細(xì)胞、HSC可見少量陽性物質(zhì)；S1、S2陽性物質(zhì)主要分布在HSC、肝細(xì)胞胞漿內(nèi)，且染色較深；S3、S4陽性物質(zhì)在HSC、肝細(xì)胞胞漿及肝竇內(nèi)皮細(xì)胞的表達(dá)明顯增多。3肝組織FAK含量隨著纖維化程度的加重而逐漸增加(p<0.05)。S0染色陽性物質(zhì)在血管壁平滑肌細(xì)胞表達(dá)，S1、S2主要分布在肝竇壁、匯管區(qū)的膽管壁以及匯管區(qū)周圍炎

8、性壞死區(qū)，S3、S4在纖維間隔、血管壁均有表達(dá)。4肝組織α-SMA含量隨著纖維化程度的加重而逐漸增加(p<0.05)。S0染色陽性物質(zhì)在血管壁平滑肌細(xì)胞表達(dá)，S1、S2主要分布在肝竇壁、匯管區(qū)的膽管壁以及匯管區(qū)周圍炎性壞死區(qū)，S3、S4在纖維間隔、血管壁均有表達(dá)。5肝組織FN含量隨著纖維化程度的加重而逐漸增加(p<0.05)。S0、S1陽性物質(zhì)主要集中在肝竇和基底膜，S2染色陽性物質(zhì)主要沉積于匯管區(qū)、纖維間隔，S3到S4以纖維間隔分布為

9、主。6肝組織TGF-β1含量隨著纖維化程度的加重而逐漸增加(p<0.05)。S0未見明顯陽性物質(zhì)，S1、S2陽性物質(zhì)主要分布在肝竇壁、竇周細(xì)胞、壞死區(qū)以及匯管區(qū)周圍，著色較淺。S3、S4陽性物質(zhì)在肝細(xì)胞、纖維間隔及血管壁中均有表達(dá)，且著色較深。7整合素α5β1分別與FAK、FN、α-SMA、TGF-β1之間呈明顯正相關(guān)關(guān)系(P<0.01)，整合素α5β1、FAK、FN分別與血清PCⅢ、ⅣC、HA、LN之間呈明顯正相關(guān)(P<0.01)。結(jié)

10、論：1從臨床角度、細(xì)胞和蛋白水平證實(shí)，肝組織中整合素α5β1、FAK、FN、α-SMA、TGF-β1在慢性乙型肝炎肝纖維化形成中起著重要作用，并且與肝纖維化程度成正比，其表達(dá)程度有助于肝纖維化程度的診斷。 2從信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)水平探討慢性乙型肝炎肝纖維化的發(fā)生機(jī)制。證實(shí)了整合素及其引發(fā)的信號(hào)傳遞途徑與FAK密切相關(guān)，在HSC激活及肝纖維化形成過程中起著十分重要的作用。 3為臨床上研究阻斷或延緩肝纖維化提供了新的治療靶點(diǎn)和理論依據(jù)