慢性乙型肝炎患者整合素αvβ3的表達和肝纖維化無創(chuàng)診斷模型的評價.pdf

1、肝纖維化是各種慢性肝病發(fā)展至肝硬化的必經(jīng)階段，早期發(fā)現(xiàn)和實時干預(yù)是肝纖維化防治的關(guān)鍵。肝穿刺活檢是明確肝病病因，評價肝臟的炎癥壞死及纖維化程度的金標(biāo)準(zhǔn)，但仍有許多不足之處，如創(chuàng)傷性、取樣誤差、觀察者自身及觀察者間偏差等。因此臨床上迫切需要尋找簡單且易推廣的非創(chuàng)傷性診斷方法診斷和評估肝纖維化。目前，針對肝纖維化的非創(chuàng)傷性診斷方法主要包括肝纖維化非創(chuàng)傷性診斷模型和生物標(biāo)志分子靶向診斷技術(shù)，日益成為世界性的研究熱點。
　　本研究的目的是

2、通過對各個肝纖維化非創(chuàng)傷性診斷模型的驗證和分析比較，評價其診斷價值，為慢性乙型肝炎肝纖維化臨床診斷和療效考核提供依據(jù)。同時檢測整合素αvβ3在人活化肝星狀細胞和慢性乙型肝炎患者肝組織中的表達，研究整合素αvβ3和肝纖維化之間的關(guān)系，探討以整合素αvβ3作為反映肝纖維化進展的生物標(biāo)志的可能性。
　　本研究的主要內(nèi)容分為二部分：慢性乙型肝炎患者肝纖維化無創(chuàng)診斷模型的評價；整合素αvβ3受體在人肝星狀細胞的表達及其整合素αvβ3、α-平

3、滑肌肌動蛋白(α-SMA)、CD31在慢性乙型肝炎患者肝纖維化組織中的表達，探討以整合素αvβ3作為反映肝纖維化進展的生物標(biāo)志的可能性。
　　第一部分慢性乙型肝炎患者肝纖維化無創(chuàng)診斷模型的評價
　　背景：近年來，國內(nèi)外提出了一系列肝纖維化非創(chuàng)傷性診斷模型，這些預(yù)測模型大多數(shù)來自于慢性丙型肝炎肝纖維化，在中國的慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染患者中尚未得到有效驗證和臨床應(yīng)用。
　　目的：通過對慢性HBV感染患者各個肝纖維化

4、非創(chuàng)傷性診斷模型的驗證和分析比較，評價其診斷價值，為慢性乙型肝炎肝纖維化臨床診斷和療效考核提供依據(jù)。
　　方法：選取112例慢性HBV感染患者，進行肝組織活檢的病理學(xué)分期，并檢測血清指標(biāo)，用靈敏度等診斷試驗評價指標(biāo)、受試者工作曲線(RDC)及連續(xù)區(qū)間似然比等方法評估APRI指數(shù)、Foms指數(shù)、S指數(shù)、APAG指數(shù)和Fibroindex等模型的診斷價值。
　　結(jié)果：各指標(biāo)組合模型對肝纖維化程度都具有一定診斷價值，其中APAG模

5、型和S指數(shù)模型表現(xiàn)較佳。APAG指數(shù)模型判斷有無顯著性肝纖維化、重度肝纖維化和早期肝硬化時的ROC曲線下面積(AUC)分別達0.858、0.891、0.930，以0.27為界定值排除顯著性肝纖維化的敏感性、特異性和陰性預(yù)測值分別為98％、24％和92％：以0.8為界定值診斷顯著肝纖維化的敏感性、特異性和陽性預(yù)測值分別為64％、91％和90％，45.5％患者可被正確預(yù)測有無顯著性肝纖維化。S指數(shù)模型判斷有無顯著性肝纖維化、重度肝纖維化和早

6、期肝硬化時的ROC曲線下面積(AUC)分別達0.837、0.847、0.866，以0.1為界定值排除顯著性肝纖維化的敏感性、特異性和陰性預(yù)測值分別為94％、47％和85％：以0.5為界定值診斷顯著肝纖維化的敏感性、特異性和陽性預(yù)測值分別為59％、91％和90％，52.7％患者可被正確預(yù)測有無顯著性肝纖維化。用連續(xù)區(qū)間似然比方法分析發(fā)現(xiàn)當(dāng)APRI指數(shù)值≥1.0，則可以基本肯定患者有顯著性肝纖維化，當(dāng)≤0.3則可以基本排除患者有顯著性肝纖維

7、化，介于0.3～1.0之間的患者還要進一步通過肝穿刺或其他方法證實。
　　結(jié)論：肝纖維化非創(chuàng)傷性診斷模型能較好地區(qū)分存在顯著性肝纖維化的慢性乙型肝炎患者，其中以APAG模型和S指數(shù)模型較為簡便有效，可以避免部分患者行肝穿刺檢查。應(yīng)用連續(xù)區(qū)間似然比方法優(yōu)化了基于慢性丙型肝炎患者建立的診斷模型，能評價部分處于上下二個界值之間的患者，提高其預(yù)測準(zhǔn)確性，使更多患者免于肝穿刺及其他檢測方法。
　　第二部分整合素αvβ3在人肝星狀細胞和

8、慢性乙型肝炎患者肝纖維化組織中的表達
　　背景：HSC增殖及細胞表型轉(zhuǎn)化、ECM合成增多沉積同時伴有新生血管形成是進展性肝纖維化修復(fù)重建中突出的病理表現(xiàn)。整合素是一類細胞黏附分子，主要介導(dǎo)細胞與ECM、細胞與細胞間的黏附和細胞內(nèi)外的信息傳遞，調(diào)節(jié)細胞增殖、生長及分化等。整合素αVβ3是多種ECM的受體，主要傳遞和細胞增殖、分化、運動、分布、定居、生存或凋亡等有關(guān)的細胞信號。正常肝組織僅門靜脈周圍表達少量整合素αVβ3，在肝實質(zhì)中不

9、表達，HSC活化和血管新生時表達明顯上調(diào)。在大鼠肝纖維化模型中發(fā)現(xiàn)整合素αVβ3表達增加與肝纖維化進展一致，肝纖維化進展中整合素αVβ3表達水平增加與HSC活化和血管新生有關(guān)，并與間質(zhì)重建程度平行。但是在慢性乙型肝炎患者肝纖維化過程中，肝組織中整合素αvβ3的表達及血管新生情況尚不明確。
　　目的：探討人活化肝星狀細胞中整合素αvβ3和α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)的表達，研究慢性乙型肝炎患者肝組織中整合素αvβ3、α-SMA和

10、CD31在不同肝纖維化分期的表達，探討以整合素αvβ3作為反映肝纖維化進展的生物標(biāo)志的可能性。
　　方法：通過體外培養(yǎng)人類活化的肝星狀細胞株LX-2，用Western blot方法定量檢測人活化HSC中的整合素旺αvβ3和α-SMA的表達，并用細胞免疫熒光染色觀察整合素αvβ3和α-SMA在人活化HSC的表達。112例慢性乙型肝炎患者行肝組織活檢，常規(guī)蘇木精.伊紅(HE)染色、Masson及網(wǎng)狀纖維染色，并用免疫組織化學(xué)染色檢測不

11、同肝纖維化分期整合素αvβ3、α-SMA和CD31的表達。
　　結(jié)果：免疫熒光染色顯示人活化HSC中整合素αvβ3聚集表達于細胞膜和細胞漿，表達部位與伸展的細胞外形一致，α-SMA表達于細胞漿，二者在胞漿中的表達部位相似；從蛋白質(zhì)表達水平研究發(fā)現(xiàn)在人活化HSC中存在整合素αvβ3與α-SMA的表達。隨著肝纖維化程度的加重，肝實質(zhì)中整合素αvβ3、α-SMA和CD31表達范圍明顯擴大，從匯管區(qū)向肝實質(zhì)深入，在S4期患者擴大的匯管區(qū)及

12、纖維間隔中有新生血管形成。肝組織整合素αvβ3、α-SMA和CD31的表達和肝纖維化程度呈正相關(guān)(P<0.01)，S2-4分期(即有顯著性肝纖維化)患者肝組織中的整合素αvβ3、α-SMA和CD31的表達明顯高于S0-1分期(即無顯著性肝纖維化)的患者(P<0.001)。免疫熒光染色顯示肝組織整合素αvβ3和α-SMA兩者表達部位基本一致。
　　結(jié)論：人HSC中整合素αvβ3的表達與HSC活化有關(guān)。慢性乙型肝炎患者肝纖維化進展過程