廣西BTV感染及傳播媒介調(diào)查、病毒分離鑒定與致病性初步研究.pdf

1、藍(lán)舌?。╞luetongue，BT）是由藍(lán)舌病毒（bluetonguevirus，BTV）引起的出血性疾病，目前已報(bào)道27個(gè)血清型。BT廣泛分布于溫帶、亞熱帶及熱帶地區(qū)，通過(guò)嗜血媒介昆蟲(chóng)吮吸帶毒血液后叮咬易感動(dòng)物傳播，反芻動(dòng)物均能感染，羊、牛為本病主要易感動(dòng)物。
　　利用本實(shí)驗(yàn)室采集2009-2015年廣西13市6683份牛羊血清，在檢測(cè)出2032份BTV抗體陽(yáng)性血清樣品中，以C-ELISA方法篩選出500份強(qiáng)陽(yáng)性血清，與OIE公

2、布的BTV1-24型標(biāo)準(zhǔn)毒株分別進(jìn)行微量血清中和試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)廣西畜群中存在BTV-1、2、3、4、5、8、9、11、15、16、17、18、19、20、22、23及24等17個(gè)血清型。其中，BTV-5、8、11、13、17、18、19、20、22為國(guó)內(nèi)首次報(bào)道。統(tǒng)計(jì)分析表明，BTV-1、2和4為廣西流行的優(yōu)勢(shì)血清型。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，廣西畜群存在BTV不同血清型的混合感染。
　　本研究在南寧市隆安縣、玉林市興業(yè)縣、北海市合浦縣設(shè)立

3、三處監(jiān)控點(diǎn)并對(duì)監(jiān)控點(diǎn)采集的傳播媒介樣品進(jìn)行鑒定。共鑒定出7個(gè)庫(kù)蠓品種，除已報(bào)道過(guò)的尖喙庫(kù)蠓、肩宏庫(kù)蠓、荒川庫(kù)蠓、異域庫(kù)蠓，還新發(fā)現(xiàn)了淡角庫(kù)蠓、光胸庫(kù)蠓和無(wú)害庫(kù)蠓。其中尖喙庫(kù)蠓、荒川庫(kù)蠓、異域庫(kù)蠓為已知的BTV傳播媒介。
　　對(duì)監(jiān)控點(diǎn)采集的2015年10-11月份哨兵動(dòng)物的100份肝素鈉抗凝血進(jìn)行病毒分離，以雞胚接種(E)、BHK21細(xì)胞傳代(B)、C6/36細(xì)胞傳代(A)三種途徑共分離得到23株病毒。通過(guò)AC-ELISA及qPCR

4、方法鑒定，其中18株為BTV。通過(guò)微量病毒中和試驗(yàn)及病毒型特異性基因VP2擴(kuò)增確定分離毒株的血清型。目前已確定5株病毒分屬3個(gè)血清型，除一株為羊源BTV-16外，其余4株為牛源毒株，包括BTV-1、BTV-21各一株，BTV-16二株。對(duì)上述毒株的VP2、VP7和NS3/NS3A三個(gè)基因節(jié)段進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析，發(fā)現(xiàn)廣西分離株的上述基因大部分屬于BTV東方亞群，與日本、印度株同源性高。但來(lái)自羊源BTV-16的VP7節(jié)段卻屬于西方亞群，提示，

5、該毒株的基因組可能發(fā)生分子重配，該片段或許來(lái)自外來(lái)毒株。
　　選取牛源BTV-16型毒株人工感染牛與豬，對(duì)其致病性進(jìn)行初步研究。攻毒8天后，實(shí)驗(yàn)牛僅觀察到鼻黏膜充血，剖檢僅見(jiàn)咽喉黏膜充血，睪丸有出血點(diǎn)等輕微病變，未觀察到舌發(fā)紺，口腔潰瘍，肺充血、水腫等BT典型癥狀;qPCR檢測(cè)顯示，外周血液中的病毒含量最高，其次是肺臟和脾臟，病毒的體內(nèi)分布與早前報(bào)道一致。而在40天的試驗(yàn)周期內(nèi)，試驗(yàn)豬各組織器官中均未檢出BTV核酸，表明分離毒株在