廣東地區(qū)慢性HCV感染者IL28B基因多態(tài)性的分布及臨床意義.pdf

1、背景：
　　丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）是感染人體后，導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷，繼而引起肝臟炎癥、變性、壞死，甚至終末期肝病，如肝硬化、肝癌等。這除與感染HCV病毒基因型有關(guān)外，還與宿主免疫狀態(tài)、細(xì)胞因子基因型及表達(dá)水平等原因有關(guān)。人體在感染HCV后，大約20％的感染者能自發(fā)清除病毒，自發(fā)性清除依賴(lài)于宿主和病原體相關(guān)的因素，宿主免疫反應(yīng)在自發(fā)清除中占重要地位，當(dāng)這種免疫應(yīng)答不能徹底清除 HCV時(shí)，將會(huì)導(dǎo)致慢性感

2、染的發(fā)生。而慢性炎癥會(huì)促使肝臟組織纖維大量增生，甚至導(dǎo)致相關(guān)性肝硬化、肝癌的發(fā)生。因此丙型肝炎感染的結(jié)局除了病毒因素之外，還存在種族人群的差異。由此表明宿主遺傳因素對(duì)疾病的發(fā)生、預(yù)后具有重要影響。
　　人類(lèi)基因組計(jì)劃研究顯示人類(lèi)基因的同源性為99.9%,僅0.1%的差異就決定了人們遺傳性狀的不同、對(duì)某些疾病易感性的不同及對(duì)某些藥物治療反應(yīng)效果的不同,這些差異集中表現(xiàn)在核苷酸位點(diǎn)的變異，被稱(chēng)為單核苷酸多態(tài)性（single nucle

3、otide polymorphisms，SNPs)。目前國(guó)內(nèi)外已有多個(gè)研究發(fā)現(xiàn)位于染色體19的編碼干擾素λ-3的IL28B基因具有SNP，其中rs12980275、rs8099917、rs12979860三個(gè)位點(diǎn)的變異與HCV自發(fā)清除、干擾素治療應(yīng)答相關(guān)性較大，且存在種族差異。但有關(guān)IL28B以上三個(gè)位點(diǎn)的變異與HCV病毒載量、肝功能之間的關(guān)系研究相對(duì)較少，特別是廣東地區(qū)IL28B基因多態(tài)性與HCV病毒載量、基因型和肝功能之間的關(guān)系的研

4、究尚未見(jiàn)報(bào)道，廣東地區(qū)IL28B基因多態(tài)性rs12980275、rs8099917、rs12979860三個(gè)位點(diǎn)的分布及其與長(zhǎng)效干擾素療效的相關(guān)報(bào)道尚少。
　　研究目的：
　　研究廣東地區(qū)IL28B基因多態(tài)性的分布特點(diǎn)及其與HCV病毒載量、基因型和肝功能之間的關(guān)系，研究其與長(zhǎng)效干擾素抗病毒療效之間的關(guān)系，探討 IL28B多態(tài)性在 HCV感染相關(guān)疾病中的可能作用，探討是否可將IL28B基因型作為臨床轉(zhuǎn)歸、療效預(yù)測(cè)的判斷指標(biāo)。<

5、br>　　研究對(duì)象及研究方法：
　　1.選擇我院診斷符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病和寄生蟲(chóng)病學(xué)分會(huì)與肝病學(xué)分會(huì)于2008年聯(lián)合制定的《丙型肝炎防治指南》標(biāo)準(zhǔn)的慢性丙型肝炎（chronic hepatitis C，CHC）患者94例，其中74例給予抗HCV治療（長(zhǎng)效干擾素聯(lián)合利巴韋林治療）。標(biāo)本收集方法：對(duì)于74例抗病毒治療患者，收集患者治療前，治療4周、12周、24周、48周和停藥后24周的外周靜脈抗凝血，分離血漿和外周血單個(gè)核細(xì)胞（per

6、ipheral blood mononuclear cells，PBMC）；對(duì)于20例未行抗病毒治療患者，只收集患者一次外周靜脈抗凝血，分離血漿和PBMC。
　　2.提取患者PBMC中基因組DNA，設(shè)計(jì)特異性引物分別擴(kuò)增包含IL28B基因rs12980275、rs12979860及rs8099917的區(qū)域，測(cè)序分析各SNP位點(diǎn)基因型。
　　3.采用中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司試劑盒熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法測(cè)定血漿HCV載量。<

7、br>　　4.采用丙型肝炎病毒分型特異性引物及熒光探針，應(yīng)用一步法聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)結(jié)合Taqman技術(shù)，對(duì)丙型肝炎病毒進(jìn)行1型和非1型的熒光PCR分型檢測(cè)（上海之江生物科技股份有限公司）。
　　5.肝功能檢測(cè)：采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)（儀器廠家：日本OLYMPUS AU2700）。
　　6.所有數(shù)據(jù)采用SPSS16.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析學(xué)處理，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料根據(jù)數(shù)據(jù)情況采用卡方檢驗(yàn)或精確概率計(jì)算法檢驗(yàn)；P<0.05為差

8、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　研究?jī)?nèi)容及研究結(jié)果：
　　1.94例慢性HCV感染者均完成宿主IL28B基因測(cè)序，rs12980275位點(diǎn)基因型為AA、AG、GG各75（79.8%）、19（20.2%）、0（0%）例；rs12979860位點(diǎn)基因型為CC、CT、TT各78（83.0%）、16（17.0%）、0（0%）例；rs8099917位點(diǎn)基因型為T(mén)T、TG、GG各82（87.2%）、12（12.8%）、0（0%）例。
　　2

9、.94例患者中共有89例進(jìn)行了HCV基因分型檢測(cè)，其中HCV-1型占74.2%，HCV-非1型占25.8%，兩者之間有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.005）。
　　3.94例患者入組時(shí)均進(jìn)行了肝功能及HCV-RNA載量的檢測(cè)，IL28B rs12980275、rs12979860、rs8099917三個(gè)位點(diǎn)的變異與血清總膽紅素（TB）、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、白蛋白（ALB）、膽堿酯酶（CHE）、血漿凝血酶原時(shí)間（PT）及HCV

10、-RNA水平均無(wú)關(guān)系（P＞0.05）；rs8099917、rs12980275位點(diǎn)的變異與丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）的水平無(wú)關(guān)（P＞0.05），而rs12979860位點(diǎn)基因型為CC者，其ALT水平較CT者高，結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.008）。
　　4.74名慢性HCV感染者長(zhǎng)效干擾素聯(lián)合利巴韋林治療后RVR率為66.2%，SVR率為77.0%。HCV-1型感染者與HCV-非1型感染者長(zhǎng)效干擾素療效無(wú)明顯差異（P＞0.05）。對(duì)

11、HCV-1型患者，僅rs12979860 CC型與SVR有關(guān)，結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（SVR組 vs. Non SVR組，88.4% vs.58.3%，P＜0.05）；對(duì)HCV-非1型患者，rs8099917、rs12979860、rs12980275三個(gè)位點(diǎn)與RVR、SVR均無(wú)關(guān)，結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　研究結(jié)論：
　　1．廣東地區(qū)慢性HCV感染者IL28B基因rs12980275、rs12979860、rs80

12、99917位點(diǎn)分別以AA（占79.8%）、CC（占83.0%）、TT（占87.2%）為主；
　　2．rs12980275、rs12979860、rs8099917三個(gè)位點(diǎn)的變異與廣東地區(qū)慢性HCV感染者的外周血HCV-RNA水平均無(wú)關(guān)；rs12979860 CC型者具有較高的ALT水平；
　　3．廣東地區(qū)慢性HCV感染者使用長(zhǎng)效干擾素+利巴韋林聯(lián)合治療后能獲得較好的臨床療效；
　　4．對(duì)于慢性HCV-1型感染者，rs1