硫化氫對蝮蛇毒致大鼠急性肺損傷肺組織細胞凋亡的影響及可能機制.pdf

1、目的：
　　通過觀察增減機體內(nèi)H2S的含量對蝮蛇毒致SD大鼠急性肺損傷時肺組織細胞凋亡及凋亡相關(guān)通路蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-9、Caspase-3表達的影響，探討H2S/CSE體系對蝮蛇毒致急性肺損傷時肺組織細胞凋亡的影響及其機制。
　　方法：
　　健康清潔級SD（sprague-dawley）雄性大鼠36只，采用完全隨機分組法分6組，每組6只：生理鹽水空白對照組（N組，注射用生理鹽水2ml/kg），蛇

2、毒組（C組，蛇毒1.50mg/kg），蛇毒+低劑量 NaHS組（L組，蛇毒1.50mg/kg+NaHS0.78mg/kg），蛇毒+中劑量 NaHS組（M組，蛇毒1.50mg/kg+NaHS1.56mg/kg），蛇毒+高劑量 NaHS組（H組，蛇毒1.50mg/kg+NaHS3.12mg/kg），蛇毒+PPG組（P組，蛇毒1.50mg/kg+PPG30mg/kg）。按照實驗分組分別予以腹腔內(nèi)注射生理鹽水及腹蛇毒素，3小時后按分組分別腹腔內(nèi)

3、注射NaHS及PPG。于注射蝮蛇毒素6小時后處死大鼠，采集肺組織標本。病理切片HE染色光鏡下評估肺組織病理學(xué)變化并進行肺損傷病理評分，流式細胞術(shù)測各組肺組織細胞凋亡率，免疫組織化學(xué)法測Bcl-2和Bax蛋白分布和表達，免疫印跡法測Caspase-9和Caspase-3蛋白表達。
　　結(jié)果：
　　1.肺組織病理學(xué)改變
　?。?）大體觀：N組肺組織顏色呈淡粉紅色，表面光滑，無出血點，無水腫。C組可見肺組織明顯充血水腫，外觀

4、呈紅色，見大片的暗紅色出血灶。L組、M組以及H組見肺組織充血水腫依次緩解。P組損傷程度較C組嚴重，肺組織外觀呈紅色，大片新鮮出血病灶，肺組織嚴重充血水腫。
　　（2）鏡下觀：N組肺泡無水腫及透明膜形成，肺間質(zhì)不增寬，肺泡腔及肺間質(zhì)未見紅細胞漏出及炎癥細胞侵潤，無肺不張。C組可見肺泡結(jié)構(gòu)明顯紊亂、破壞，肺泡結(jié)構(gòu)不完整，明顯肺泡水腫，大量透明膜形成，肺間質(zhì)明顯增厚，肺間質(zhì)及肺泡大量紅細胞及粒細胞侵潤，大面積肺不張，與N組比較，其肺損傷

5、評分明顯升高（P<0.01）。L組與C組比較，肺組織損傷尚未見明顯改善，肺損傷評分無統(tǒng)計學(xué)意義。M組及H組肺組織結(jié)構(gòu)較C組破壞程度明顯減輕，肺泡及肺間質(zhì)水腫減輕，紅細胞和粒細胞滲出明顯減少，透明膜減少，肺不張面積減小，肺損傷評分均明顯降低（P<0.01）。P組肺組織損傷程度較C組更嚴重，表現(xiàn)為大面積肺泡水腫，大量透明膜形成，肺泡結(jié)構(gòu)大面積破壞，肺間質(zhì)增厚，大量紅細胞和粒細胞滲出，大面積肺不張，肺損傷評分明顯升高（P<0.05）。

6、　　2.細胞凋亡率的變化
　　與N組比較，其余各處理組肺組織細胞凋亡率均明顯升高（P<0.01）。與C組比較，L、M、H組細胞凋亡率均明顯下降（P<0.01）；P組肺組織凋亡率明顯升高（P<0.01）。
　　3.肺組織Bax和Bcl-2蛋白的分布和表達以及Bcl-2/Bax比值的變化
　　Bax和Bcl-2蛋白表達陽性被染色呈棕黃色，主要表達于肺泡上皮和支氣管上皮，于血管內(nèi)皮細胞及炎癥細胞內(nèi)亦有表達。N組可見少量Bax

7、和Bcl-2蛋白陽性表達。與N組比較，C組Bcl-2蛋白的表達增強（P<0.01），Bax蛋白表達明顯增強（P<0.01），Bcl-2/Bax比值明顯降低（P<0.01）。與C組比較， L、M、H組Bcl-2蛋白表達均明顯增強（P<0.01）；而M、H組Bax蛋白表達則明顯減少（P<0.01）；L、M、H組Bcl-2/Bax比值明顯升高（P<0.01或P<0.05）。與C組比較，P組 Bcl-2蛋白表達明顯減弱（P<0.05），Bax蛋

8、白表達明顯增加（P<0.05），Bcl-2/Bax比值明顯下降（P<0.05）。
　　4.肺組織Caspase-3及Caspase-9蛋白表達的變化
　　N組有Caspase-3及Caspase-9蛋白表達。與N組比較，C組Caspase-3及Caspase-9蛋白表達明顯增加（P<0.01）。與C組比較，L、M、H組 Caspase-3蛋白表達均明顯減弱（P<0.01），M、H組Caspase-9蛋白表達亦明顯減弱（P<0

9、.01）；P組Caspase-3和Caspase-9蛋白表達均明顯增強（P<0.01或P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.蝮蛇毒可以導(dǎo)致SD大鼠產(chǎn)生急性肺損傷。
　　2.蝮蛇毒致SD大鼠急性肺損傷時，肺組織細胞凋亡率明顯上升。
　　3. H2S可以抑制蝮蛇毒致SD大鼠急性肺損傷時肺組織細胞凋亡，對急性肺損傷起到保護作用。其機制可能與上調(diào)Bcl-2蛋白表達，下調(diào)Bax、Caspase-9、Caspase-3蛋白表