IP-10基因治療聯(lián)合吉西他濱抗腫瘤實驗研究.pdf

1、趨化因子(chemokine)是一類小分子物質，有誘導體內(nèi)白細胞運輸?shù)墓δ?。IP-10(Interferon-γ-inducibleprotein10)是α趨化因子家族成員，具有抗血管作用，表現(xiàn)為抑制新生血管的形成。許多文獻報道IP-10具有抑制腫瘤血管的作用，而且還有研究表明，化療與抗腫瘤血管治療結合具有協(xié)同作用。但IP-10基因治療聯(lián)合化療藥物吉西他濱治療腫瘤尚未見報道。本研究擬用IP-10基因與化療藥物吉西他濱聯(lián)合，觀察抗小鼠腫瘤

2、作用并初步探討其作用機理。 首先將pBLASTIP-10質粒轉化至大腸桿菌E.coliJM109中，挑取單菌落經(jīng)培養(yǎng)擴增后，制備并純化質粒。采用脂質體轉染法將IP-10質粒DNA導入COS細胞，免疫印跡法(Westernblot)及ELISA方法檢測轉染上清中IP-10的表達，觀察表達IP-10蛋白的上清聯(lián)合吉西他濱對體外培養(yǎng)的內(nèi)皮細胞(HUVEC，SVEC)的增殖抑制情況。結果表明轉染IP-10基因的COS細胞能表達具有生物學

3、活性的IP-10蛋白，IP-10聯(lián)合吉西他濱能增強抑制內(nèi)皮細胞的增殖。 研究IP-10基因在小鼠體內(nèi)的表達，分別以不同劑量的IP-10質粒DNA肌肉注射，ELISA方法檢測不同的時間點小鼠血清中IP-10蛋白表達，結果發(fā)現(xiàn)IP-10在小鼠體內(nèi)可以持續(xù)表達，以每次100μg質粒DNA注射時表達濃度最高，200μg質粒注射未產(chǎn)生明顯增高的蛋白表達。以不同劑量IP-10質粒DNA肌肉注射荷瘤小鼠，結果顯示IP-10基因的體內(nèi)抗腫瘤作用

4、存在劑量依賴性。采用動物實驗方法研究IP-10基因治療聯(lián)合化療藥物吉西他濱的抗腫瘤效果。建立BALB/c小鼠肝癌(H22)和C57BL/6小鼠Lewis肺癌(LL/2)兩種動物腫瘤模型，分別隨機分為IP-10基因聯(lián)合吉西他濱組，吉西他濱組，IPP-10基因組及生理鹽水組。探討IP-10基因治療聯(lián)合化療藥物吉西他濱的抗腫瘤效果及作用機制。觀察小鼠生存情況，記錄生存率及腫瘤體積變化。實驗發(fā)現(xiàn)：聯(lián)合治療組小鼠腫瘤的生長明顯減慢，荷瘤小鼠生存期

5、延長，部分小鼠腫瘤甚至完全消退。腫瘤組織微血管免疫組化染色，計數(shù)每高倍視野微血管數(shù)，發(fā)現(xiàn)兩種荷瘤小鼠聯(lián)合治療組及IP-10基因組微血管密度明顯低于吉西他濱組和生理鹽水組；TUNEL法檢測腫瘤組織中細胞凋亡，結果顯示聯(lián)合治療組腫瘤組織中細胞凋亡明顯增多。藻酸鹽包裹實驗結果顯示：IP-10基因治療聯(lián)合吉西他濱組血管生成明顯減少，與其它各組比較FITC攝取率明顯降低。本研究還觀察了IP-10基因治療聯(lián)合吉西他濱抗腫瘤治療的毒副作用，結果顯示在