TNF-α及IL-4在實驗性慢性末端回腸炎的表達和意義.pdf

1、目的：研究腫瘤壞死因子-α(tumour necrosis factor-a,TNF-α)和白介素-4(interleukin-4,IL-4)在慢性末端回腸炎(Chronic Terminal Ileiti, CTI)中的表達水平，探討TNF-α和IL-4對實驗性末端回腸炎的發(fā)生、發(fā)展及治療的關(guān)系。
　　方法：選擇60只雄性SD大鼠隨機分為三組：對照組（A）、造模組(B)、縫線組(C)，對照組常規(guī)麻醉，造模組采用末端回腸-盲腸吻合

2、術(shù)，縫線組在回腸末端僅作手術(shù)縫線，分別于第2、8周處死，取大鼠回腸末端，RT-PCR法檢測TNF-αmRNA、IL-4 mRNA的表達水平。余標本置于4％甲醛中浸泡24小時，對末端回腸組織進行蘇木素－伊紅（hematoxylin-eosin staining,HE）后，觀察其病理學變化，并對其炎癥評分（histopathological score, HS）及免疫組織化學染色。
　　結(jié)果：
　　1.一般情況：A組大鼠的被毛有

3、光澤，活動自如，食量正常，糞便呈顆粒樣。B組與C組動物在術(shù)后第3天均出現(xiàn)精神萎靡、懶動，飲食及體重下降。術(shù)后12天開始，各組SD大鼠一般情況開始恢復，但B組SD大鼠的體重在術(shù)后2周之前較其他兩組恢復慢，但在術(shù)后3-8周時三組 SD大鼠體重無明顯差異（P＞0.05）。
　　2.末端回腸組織肉眼組織病理學評分：術(shù)后2周，B、C組可見組織粘膜充血、水腫，表現(xiàn)為急性炎性反應(yīng)，兩組評分差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；術(shù)后8周時，B組SD大

4、鼠末端回腸腸管粘連、狹窄，B組與A、C組比較差異有顯著性(P<0.05)，A、C組回腸末端組織未見明顯炎性細胞浸潤及結(jié)構(gòu)破壞，兩組差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）。
　　3、回腸末端組織鏡下炎癥評分：2周時，B組與C組末端回腸鏡下觀均可見中性粒細胞浸潤， B、C組炎癥評分差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05），但C組低于B組（P<0.05)。第8周，B組鏡下見大量炎癥細胞浸潤粘膜及粘膜下層，主要是淋巴細胞，部分粘膜有脫落、糜爛、淺潰瘍形

5、成現(xiàn)象。B組與C組相比評分明顯增加，8周時B組炎癥最為明顯時期(P＜0.05）。C組與A組相比差異無顯著性(P＞0.05）。B組2至8周大體肉眼觀及鏡下觀炎癥評分升高趨勢一致。
　　4、末端回腸組織TNF-αmRNA的表達水平術(shù)后2周時，三組SD大鼠末端回腸組織中TNF-α mRNA的表達水平，三組進行比較，總體來說差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05）。B組最高，較A、C組明顯升高(P＜0.05）。在術(shù)后8周時，B組中TNF-αmRN

6、A的表達水平明顯升高，B組與A、C比較差異有顯著性意義(P＜0.05），A組與C組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）。表明TNF-α在末端回腸炎的發(fā)病過程中有明顯的促炎作用，并與末端回腸炎性活躍程度呈正相關(guān)。
　　5.免疫組化顯示TNF-a陽性表達于細胞漿或者細胞核，呈現(xiàn)棕黃色顆粒，術(shù)后2周時，A、B、C組末端回腸組織的TNF-α表達率分別為10.0%,80.0%,70.0%.8周時，A、B、C組末端回腸組織的TNF-α表達率分

7、別為10.0%,90.0%,40.0%.2、8周時，三組進行比較，總體來說有差異。2周時，B、C組中TNF-α表達率均較A組高，8周時，B組中TNF-α表達率較A、C組均高。2周時，B組、C組中TNF-α的平均吸光度值均較 A組高，兩組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05），兩組與A組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05)。8周時，B組吸光值有所升高，但C組明顯降低，兩組評分比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05），C組與A組比較差異無統(tǒng)計學

8、意義(P>0.05）
　　6、末端回腸組織IL-4的表達水平 A組的IL-4 mRNA表達水平高于術(shù)后2周時的B、C組，且差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05），B組與C組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）；術(shù)后8周時，三組之間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）。在免疫組化中，IL-4以胞質(zhì)和/或胞膜呈棕黃色為陽性，術(shù)后2周時，A、B、C組末端回腸組織中IL-4表達率分別為80.0%,30.0%,20.0%.8周時，A、B、C組末端回腸

9、組織中IL-4表達率分別為80.0%,90.0%,70.0%.2、8周時，三組進行比較，總體來說有差異。2周時，A組中IL-4表達率最高，8周時，B、C組IL-4表達率均較2周時升高。2周，三組之間差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。2周時， A組IL-4平均吸光度值均較B組、C組高，A與B、C比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。8周時，三組之間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）表明IL-4參與CTI的發(fā)病過程。
　　結(jié)論：