絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥骨代謝差異蛋白表達及電針干預作用的基礎與臨床研究.pdf

1、1.目的
　　通過觀察絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥患者和去卵巢大鼠相關骨代謝差異蛋白表達情況，及電針不同經(jīng)脈上相同神經(jīng)節(jié)段支配的穴位組（足太陽膀胱經(jīng):脾俞、腎俞;督脈:脊中、命門）對去卵巢大鼠差異蛋白和相關信號通路的影響，篩選出可評價絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥嚴重程度的骨代謝指標，并進一步闡釋電針治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的作用機制，為針灸防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥提供實驗依據(jù)。
　　2.方法
　　2.1采用懸液芯片技術(shù)分析不同骨量絕經(jīng)后婦女ACTH、

2、DKK-1、FGF-23、IL-1β、IL-6、Insulin、Leptin、OPG、BGP、Osteopontin、PTH、SOST、TNF-a、MIP-1 a、FGF-2、IL-10、MCP-1、IFN-r、RANKL、TGFβ蛋白的差別;ELISA測定不同骨量絕經(jīng)后婦女血清中BALP和TRACP5b的含量。
　　2.240只6月齡SPF級SD雌性大鼠，適應性喂養(yǎng)1周后，隨機分為假手術(shù)組(10只)和造模組（30只）。造模組大鼠

3、行雙側(cè)卵巢切除術(shù)，假手術(shù)組只打開腹腔找到卵巢但不切除。分別于術(shù)后3個月，4個月和5個月，采用雙能X線骨密度儀測定全身骨密度;放射免疫分析方法測定血清中E2水平;ELISA法測定不同程度骨質(zhì)疏松大鼠血清中BALP和TRACP5b含量;懸液芯片技術(shù)分析不同程度骨質(zhì)疏松大鼠ACTH、DKK-1、FGF-23、IL-1β、IL-6、Insulin、Leptin、OPG、BGP、Osteopontin、PTH、SOST、TNF-a、MIP-1 a

4、、FGF-2、IL-10、MCP-1、IFN-γ、RANKL、TGFβ蛋白的差別。
　　2.340只6月齡SPF級SD雌性大鼠，適應性喂養(yǎng)1周后，隨機分成假手術(shù)組（10只）和模型組(30只)。造模組大鼠術(shù)后3個月，抽簽法隨機分為3組:即模型組（10只）、治療組1（電針督脈組，10只）和治療組2（電針膀胱經(jīng)組，10只)。干預結(jié)束后，處死實驗動物，進行指標檢測。采用雙能X線骨密度儀測定全身骨密度;三點彎曲法測定左側(cè)股骨生物力學;HE染

5、色觀察右側(cè)股骨形態(tài)學變化;ELISA法測定血清中E2、BGP、BALP和TRACP5b含量;RT-PCR法檢測腰椎中Wnt1、LRP5、β-catenin、Cyclin D1、DKK-1、OPG、RANKL和RANK mRNA表達;Western Blot法檢測腰椎中Wnt1、LRP5、β-catenin、Cyclin D1、DKK-1、OPG、RANKL和RANK蛋白表達。
　　3.結(jié)果
　　3.1 PMOP患者骨代謝標志

6、物BALP、TRACP5b、DKK-1、RANKL、IL-6、OPN、BGP水平與骨密度呈負相關，OPG、Leptin、FGF-23、Insulin水平與骨密度呈正相關，且相關性有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　3.2 PMOP大鼠中BALP、TRACP5b、DKK-1、RANKL、BGP、TNF-a水平與骨密度成負相關，OPG水平與骨密度成正相關，且相關性有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　3.3與假手術(shù)組相比，模型組大

7、鼠骨密度、最大載荷和斷裂載荷均明顯降低;經(jīng)過電針督脈穴或膀胱經(jīng)穴后，骨密度、最大載荷和斷裂載荷均明顯增加，與模型組相比，具有顯著性差異(P＜0.01），但電針督脈組與電針膀胱經(jīng)組間無顯著性差異(P＞0.05)。
　　3.4假手術(shù)組中骨小梁豐富，結(jié)構(gòu)完整，骨小梁數(shù)目多，骨小梁寬度較寬，連接緊密，未見骨小梁斷裂;而在模型組骨小梁開始出現(xiàn)稀疏，骨小梁之間出現(xiàn)斷裂，骨小梁寬度變窄;經(jīng)過電針督脈或電針膀胱經(jīng)治療后，均可見較完整的骨小梁結(jié)構(gòu)，

8、骨小梁排列有序，寬度增加，無明顯骨小梁斷裂;電針督脈治療組和電針膀胱經(jīng)治療組兩組間無明顯差別。與假手術(shù)組相比，模型組Tb.Ar、Tb.N和Tb.Th均降低，Tb.Sp升高，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01）;與模型組相比，電針督脈治療組和電針膀胱經(jīng)治療組Tb.Ar、Tb.N和Tb.Th均升高，Tb.Sp降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01），但是兩組治療組間Tb.Ar、Tb.N、Tb.Th和Tb.Sp均無顯著性差異(P＞0.05)。<

9、br>　　3.5模型組E2含量明顯低于假手術(shù)組，統(tǒng)計學分析具有顯著性差異(P＜0.01);經(jīng)過電針督脈穴或電針膀胱經(jīng)穴治療后，E2含量明顯增加，與模型組相比，具有顯著性差異(P＜0.01)，但電針督脈組與電針膀胱經(jīng)組間無顯著性差異(P＞0.05);假手術(shù)組中BGP和BALP含量高于模型組，具有顯著性差異(P＜0.01）;經(jīng)過電針督脈穴或電針膀胱經(jīng)穴治療后，BGP和BALP含量進一步增加，與模型組相比，具有顯著性差異（P＜0.01），但電

10、針督脈組與電針膀胱經(jīng)組間無顯著性差異(P＞0.05);與模型組相比，TRACP5b含量高于假手術(shù)組，統(tǒng)計學分析具有顯著性差異;經(jīng)過電針督脈穴和電針膀胱經(jīng)穴治療后，TRACP5b含量明顯降低，與模型組相比，具有顯著性差異(P＜0.01)，但電針督脈組與電針膀胱經(jīng)組間無顯著性差異(P＞0.05)。
　　3.6電針對Wnt1、LRP5、β-catenin、Cyclin D1、DKK-1、OPG、RANKL和RANK mRNA的影響與其對

11、Wnt1、LRP5、β-catenin、Cyclin D1、DKK-1、OPG、RANKL和RANK蛋白的影響具有相同趨勢。與假手術(shù)組相比，模型組中Wnt1、LRP5、β-catenin、Cyclin D1、OPG、RANK含量明顯降低，具有顯著性差異(P＜0.01);經(jīng)過電針督脈穴或電針膀胱經(jīng)穴治療后，Wnt1、LRP5、β-catenin、Cyclin D1、OPG、RANK含量明顯增加，與模型組相比，具有顯著性差異(P＜0.01)

12、，但電針督脈組與電針膀胱經(jīng)組間無顯著性差異(P＞0.05);與假手術(shù)組相比，模型組中DKK-1和RANKL含量明顯升高，統(tǒng)計學分析具有顯著性差異(P＜0.01）;經(jīng)過電針督脈穴和電針膀胱經(jīng)穴治療后，DKK-1和RANKL表達量降低，與模型組相比，具有顯著性差異(P＜0.01)，但電針督脈組與電針膀胱經(jīng)組間無顯著性差異(P＞0.05)。
　　4.結(jié)論
　　4.1人血中BALP、TRACP5b、BGP、DKK-1、RANKL、O

13、PG、IL-6、Leptin、OPN、FGF-23、Insulin可作為評價絕經(jīng)后女性骨質(zhì)疏松嚴重程度的檢測指標;大鼠血中BALP、TRACP5b、BGP、DKK-1、RANKL、TNF-a、OPG可作為評價去勢大鼠骨質(zhì)疏松嚴重程度的檢測指標。其中，BALP、BGP、TRACP5b、DKK-1、OPG、RANKL可作為評價二者共同骨代謝差異的檢測指標。
　　4.2電針督脈穴或膀胱經(jīng)穴均可通過調(diào)控Wnt/β-catenin信號通路，