補(bǔ)腎化痰方對(duì)絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥模型大鼠骨吸收的影響.pdf

1、目的：
　　 從理論角度分析總結(jié)絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的病因病機(jī)，并通過實(shí)驗(yàn)研究觀察去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠骨密度和骨代謝相關(guān)指標(biāo)(血生化指標(biāo)、細(xì)胞因子等)的變化，從調(diào)節(jié)大鼠骨代謝的角度探討補(bǔ)腎化痰方對(duì)PMOP的治療作用及作用機(jī)制，為方藥的臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。
　　 方法：
　　 1理論研究
　　 系統(tǒng)回顧古今文獻(xiàn)，了解中醫(yī)理論對(duì)PMOP的病因病機(jī)、治則治法的認(rèn)識(shí)，為實(shí)驗(yàn)研究提供了決策依據(jù)。
　　 2實(shí)驗(yàn)研

2、究
　　 8月齡SD雌性大鼠切除雙側(cè)卵巢，建立絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥模型。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物機(jī)分為模型組、假手術(shù)組、西藥組、中藥中劑量組、中藥高劑量組。術(shù)后3個(gè)月開始灌胃給藥。中藥中劑量組以補(bǔ)腎化痰方9.4g/kg·b·w灌胃，中藥高劑量組以以補(bǔ)腎化痰方18.8g/kg·b·w灌胃，西藥組予以利維愛0.23 mg/kg·b·w，正常對(duì)照組、假手術(shù)組以等體積的生理鹽水灌胃。每天一次，給藥時(shí)間為8周。補(bǔ)腎化痰方由菟絲子30g、淫羊藿10g、補(bǔ)骨脂1

3、5g、全瓜蔞15g、紅曲12g，山楂20g六味中藥組成。
　　 灌胃結(jié)束后，麻醉處死大鼠，取大鼠左后肢股骨，雙能X線骨密度儀測(cè)定大鼠離體股骨的骨密度；摘除雙側(cè)眼球取血離心，取血清，ELISA法檢測(cè)各組大鼠血清中ADP、TRACP5b和β-CTX的含量；免疫組化法檢測(cè)大鼠脛骨TNF-α和IL-6水平；取大鼠股骨骨髓細(xì)胞提取總RNA，RT-PCR檢測(cè)PPARγ2 mRNA表達(dá)。
　　 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件

4、進(jìn)行方差分析，所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1理論研究
　　 回顧古今研究PMOP的相關(guān)文獻(xiàn)，對(duì)PMOP的病因病機(jī)、治則治法的認(rèn)識(shí)均認(rèn)為腎虛為發(fā)病的關(guān)鍵。但在其他致病因素方面，認(rèn)識(shí)尚不統(tǒng)一。本課題提出“脂代謝異?？赡芘cPMOP痰濁有關(guān)”的假說，并據(jù)此制定治療PMOP的新治法--補(bǔ)腎化痰法；所選補(bǔ)腎化痰方為導(dǎo)師向楠教授臨床經(jīng)驗(yàn)方，在臨床和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中都

5、已初步證實(shí)，補(bǔ)腎化痰方對(duì)PMOP有較好的治療效果。
　　 2實(shí)驗(yàn)研究
　　 與假手術(shù)組大鼠相比，去卵巢骨質(zhì)疏松癥模型組大鼠股骨骨密度明顯降低。西藥利維愛和補(bǔ)腎化痰方均能有效提高去卵巢骨質(zhì)疏松癥大鼠的骨密度，與模型組相比，差異有顯著意義。高劑量組與西藥組骨密度值差異無顯著意義。
　　 與假手術(shù)組大鼠相比，去卵巢骨質(zhì)疏松癥模型組大鼠血清生化指標(biāo)ADP、TRACP5b和β-CTX水平明顯升高。西藥利維愛和補(bǔ)腎化痰方的中

6、、高劑量組都能顯著降低OVX大鼠血清ADP、TRACP5b和β-CTX水平(與模型組相比，P<0.05)。補(bǔ)腎化痰方高劑量組降低血清生化指標(biāo)水平的作用強(qiáng)于中劑量組，兩組間ADP和TRACP5b水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，β-CTX水平差異有顯著性意義(P<0.01)。中藥高劑量組各生化指標(biāo)水平與西藥組差異無顯著意義。
　　 與假手術(shù)組大鼠相比，去卵巢骨質(zhì)疏松癥模型組大鼠骨組織HE染色可見骨髓腔擴(kuò)大，骨小梁變細(xì)，見斷裂現(xiàn)象，且占視野面積

7、降低，數(shù)目明顯減少，分布稀疏，骨小梁之間間隙增寬，排列不整齊。西藥組和補(bǔ)腎化痰方高劑量組骨髓腔較小，骨小梁數(shù)量多，斷裂較少，排列整齊，各骨小梁之間間隙較小；中藥中劑量組骨髓腔較大，骨小梁變細(xì)，骨小梁可見明顯斷裂，排列稍顯紊亂，但優(yōu)于模型組。
　　 免疫組織化學(xué)觀察可見TNF-α和IL-6在骨組織中的陽性表達(dá)主要分布于骨小梁周邊破骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞胞漿中，光鏡下觀察，呈棕黃色顆粒。與假手術(shù)組大鼠相比，去卵巢骨質(zhì)疏松癥模

8、型組大鼠骨組織中陽性細(xì)胞數(shù)明顯多于假手術(shù)組，補(bǔ)腎化痰方中、高劑量組和西藥組陽性細(xì)胞數(shù)明顯少于模型組。與假手術(shù)組大鼠相比，去卵巢骨質(zhì)疏松癥模型組大鼠骨組織TNF-α和IL-6表達(dá)明顯升高。利維愛和補(bǔ)腎化痰方都能降低骨組織TNF-α和IL-6水平。補(bǔ)腎化痰方高劑量組降低骨組織TNF-α和IL-6水平的作用強(qiáng)于中劑量組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 與假手術(shù)組大鼠相比，去卵巢骨質(zhì)疏松癥模型組大鼠骨髓骨髓細(xì)胞PPARγ2 mRNA表達(dá)明顯

9、升高。利維愛和補(bǔ)腎化痰方都能降低骨髓細(xì)胞PPARγ2 mRNA表達(dá)。補(bǔ)腎化痰方高劑量組降低骨髓細(xì)胞PPARγ2 mRNA表達(dá)的作用強(qiáng)于中劑量組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：
　　 在中醫(yī)理論指導(dǎo)下，應(yīng)用補(bǔ)腎化痰方治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥有理論基礎(chǔ)，也有實(shí)驗(yàn)研究支持。去卵巢大鼠明顯出現(xiàn)骨吸收活動(dòng)增強(qiáng)和脂代謝異常。實(shí)驗(yàn)研究所用補(bǔ)腎化痰方能增加去卵巢大鼠骨密度，降低血清骨吸收相關(guān)生化指標(biāo)水平、降低骨組織骨吸收相關(guān)細(xì)胞因子及骨