超微補陽還五湯對局灶性腦缺血模型大鼠神經(jīng)元保護效應及機制研究.pdf

1、背景：缺血性腦血管病是臨床常見病、多發(fā)病，有病死率高、致殘率高的特點，腦缺血后神經(jīng)元損害是其病理機制的核心部分，因而探尋神經(jīng)元保護劑是缺血性腦血管病的研究熱點。補陽還五湯是治療該類疾病的常用方劑之一，對缺血性腦血管病的治療具有顯著療效和一定特色。 目的： (1)通過對超微補陽還五湯與傳統(tǒng)補陽還五湯的有效成分的對比研究，探討超微復方制劑的特點，為中藥新型飲片的研制作出有益的探索。 (2)在建立局灶性腦缺血大鼠模型基

2、礎上，通過動物實驗，探討超微補陽還五湯對局灶性腦缺血大鼠神經(jīng)元損傷的保護作用及其機制，為治療腦梗塞的臨床用藥提供實驗依據(jù)。 方法： (1)采用一系列試驗對超微補陽還五湯與傳統(tǒng)湯劑的有效成分進行對比研究。對當歸、赤芍、川芎、紅花、桃仁的主要有效成分進行薄層鑒別研究，并對主要成分進行含量測定；采用《中國藥典》收錄的相關方法檢測重金屬、砷鹽含量以明確其安全性；對水溶性浸出物和正丁醇浸出物進行含量測定對比研究。 (2)采

3、用栓線法復制MCAO大鼠模型，隨機分成六組灌胃給藥；在1天、3天、7天、14天四個時點觀察各相應指標以探求超微補陽還五湯對腦缺血神經(jīng)元損傷的保護作用及機制。對大鼠腦缺血損傷的保護作用選用行為學變化及組織形態(tài)學變化等指標，從對氧自由基的影響對其進行驗證；對作用機制的探求從NGF及其受體(TRKA)的表達和信號轉導機制(PI3K/PKB)兩個方面進行。具體方法則為檢測血漿SOD、MDA的活性變化，用免疫組化法和分子生物學方法觀察對腦組織中N

4、GF、TRKA及PI3K、cREB、AKT的表達的影響。結果： (1)TLC測定各組供試樣品在色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，且復方超微補陽還五湯浸泡液中主要有效成分斑點較傳統(tǒng)湯劑更明顯，清晰；對其主要成分的含量測定顯示超微補陽還五湯中黃芪甲苷含量與傳統(tǒng)湯劑相當；對砷鹽、重金屬檢測未發(fā)現(xiàn)其含量超標；對浸出物的測定顯示超微補陽還五湯水溶性浸出物為傳統(tǒng)湯劑水溶性浸出物的1-22倍，正丁醇浸出物為其傳統(tǒng)湯劑的1.26倍，均高于傳統(tǒng)

5、湯劑。 (2)超微補陽還五湯可降低腦缺血損傷大鼠神經(jīng)功能評分，并改善腦組織缺血的病理損傷，其作用明顯優(yōu)于模型組及假手術組；超微高劑量組作用優(yōu)于傳統(tǒng)湯劑組。 (3)超微補陽還五湯可提高腦缺血后血中SOD活性并降MDA，其作用明顯優(yōu)于模型組及假手術組；超微高劑量組作用優(yōu)于傳統(tǒng)湯劑組。 (4)超微補陽還五湯可上調(diào)腦缺血后腦組織NGF及其受體TRKA的表達，并增強PI3K/AKT信號轉導的表達，其作用明顯優(yōu)于模型組及假手

6、術組；超微高劑量組與傳統(tǒng)湯劑比較其影響有明顯增高的優(yōu)勢。 結論： (1)補陽還五湯及其超微制劑可以改善局灶性腦缺血大鼠神經(jīng)功能缺損評分及腦組織病理變化，提高腦缺血后血液SOD活性并降低MDA活性以減弱氧自由基的毒性反應，對腦缺血神經(jīng)元損傷具有保護作用。 (2)超微補陽還五湯保持了傳統(tǒng)補陽還五湯中的有效成分，且有效成分的溶出相對傳統(tǒng)湯劑更具優(yōu)勢。 (3)超微補陽還五湯可提高腦缺血后腦組織神經(jīng)營養(yǎng)因子PI3K

7、/PKB信號轉導途徑的表達，提高神經(jīng)生長因子及其受體表達水平，這可能是超微補陽還五湯對腦缺血神經(jīng)元損傷的保護作用機制之一。 (4)超微補陽還五湯以1/2等效劑量時即可達與傳統(tǒng)湯劑相同的作用效果，以等效劑量時其作用效應有明顯增加的趨勢。 綜上，本論文采用藥物化學、藥理學方法以及免疫組化、分子生物學方法，以超微技術對補陽還五湯復方制劑與傳統(tǒng)補陽還五湯標準湯劑進行對照研究，論證了超微技術在促進中藥復方制劑(補陽還五湯)有效成分