銀屑病(患者)皮膚間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性及mRNA差異表達(dá)的研究.pdf

1、目的:研究銀屑病皮膚間充質(zhì)干細(xì)胞(skin-derived mesenchymal stem cells，SMSCs)生物學(xué)特性，進(jìn)一步分析銀屑病SMSCs基因表達(dá)譜，了解銀屑病患者皮損微環(huán)境中SMSCs變化，為SMSCs參與銀屑病發(fā)病提供理論依據(jù)。
　　 方法:應(yīng)用酶消化法分離培養(yǎng)銀屑病組與正常對(duì)照組SMSCs，并傳代、擴(kuò)增，收集第3代SMSCs及其培養(yǎng)上清液，倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞免疫表型，分別用

2、成脂、成骨、成軟骨誘導(dǎo)體系鑒定細(xì)胞多系分化能力，細(xì)胞計(jì)數(shù)法繪制第3代細(xì)胞生長(zhǎng)增殖曲線，ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中EGF、TGF-β1濃度。應(yīng)用基因芯片技術(shù)對(duì)其mRNA表達(dá)譜進(jìn)行差異基因篩選。RT-PCR法對(duì)銀屑病SMSCs部分差異表達(dá)基因進(jìn)行驗(yàn)證分析。
　　 結(jié)果:
　　 ①細(xì)胞形態(tài)學(xué)特性:倒置相差顯微鏡下觀察銀屑病組與正常對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)均存在異質(zhì)性。
　　 ②細(xì)胞表面標(biāo)志物測(cè)定:流式細(xì)胞儀檢測(cè)第3代培養(yǎng)細(xì)

3、胞表面抗原CD29、CD44、CD73、CD90及CD105呈高表達(dá)，CD34、CD45及HLA-DR呈低表達(dá)。
　　 ③細(xì)胞多向分化潛能測(cè)定:第3代培養(yǎng)細(xì)胞成脂、成骨、成軟骨誘導(dǎo)培養(yǎng)14d，分別用油紅O、茜素紅S、甲苯胺藍(lán)染色鑒定脂肪細(xì)胞、骨細(xì)胞及軟骨細(xì)胞，結(jié)果均為陽(yáng)性。
　　 ④細(xì)胞增殖能力檢測(cè):細(xì)胞生長(zhǎng)增殖曲線顯示銀屑病組第3代細(xì)胞增殖速度快于正常對(duì)照組。
　　 ⑤分泌細(xì)胞因子（表皮生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-

4、β1）水平測(cè)定:ELISA試劑盒檢測(cè)到銀屑病組SMSCs分泌EGF水平高于對(duì)照組(P＜0.05)，分泌TGF-β1水平低于對(duì)照組(P＜0.05)。
　　 ⑥基因譜差異表達(dá)分析:銀屑病組與正常對(duì)照組SMSCs基因表達(dá)譜顯著不同，共篩選出1927個(gè)差異表達(dá)基因(1090個(gè)基因表達(dá)呈增高趨勢(shì)，837個(gè)基因呈降低趨勢(shì));其中銀屑病組UHRF1的mRNA水平呈高表達(dá)狀態(tài)（P＜0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 ①本實(shí)驗(yàn)建立了