核磁共振代謝組學(xué)中體液樣品的制備方法及制譜參數(shù)研究.pdf

1、自1999年Nicholson及其同事在核磁共振(NMR)研究的基礎(chǔ)上提出代謝組學(xué)概念以來，基于NMR代謝組學(xué)得到了迅速地發(fā)展。目前基于NMR代謝組學(xué)的主要研究對(duì)象是體液樣品的NMR譜。由于生物體液的儲(chǔ)存、樣品制備和實(shí)驗(yàn)條件都會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響，因此研究樣品制備、儲(chǔ)存及實(shí)驗(yàn)條件可以了解外界條件對(duì)樣品的具體作用效果，從而通過控制外界環(huán)境及人為操作，以保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性和可比較性。 本文以基于NMR代謝組學(xué)試驗(yàn)中的人體的尿液、血

2、液和全唾液為主要研究對(duì)象，研究各類樣品的儲(chǔ)存、制備和制取NMR譜圖實(shí)驗(yàn)參數(shù)對(duì)NMR實(shí)驗(yàn)的影響，結(jié)合模式識(shí)別分析方法，得到適宜用于高通量試驗(yàn)的較合理參數(shù)。主要內(nèi)容及結(jié)論如下： 1.研究了實(shí)驗(yàn)條件對(duì)人體尿液樣品NMR譜圖的影響。隨著實(shí)驗(yàn)溫度變化，醋酸、甜菜堿及組氨酸的譜峰漂移明顯，為此實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)穩(wěn)定樣品溫度。NOEPR序列中預(yù)飽和功率越高，對(duì)水峰附近的共振峰壓制越大，受影響范圍也越大，應(yīng)根據(jù)需要選擇適合的功率。尿液樣品適宜用外標(biāo)法進(jìn)行

3、實(shí)驗(yàn)。 2.研究了實(shí)驗(yàn)條件對(duì)人體血液樣品NMR譜圖的影響。人體血液樣品中的纈氨酸、維生素B族及低密度脂蛋白信號(hào)強(qiáng)度隨實(shí)驗(yàn)溫度升高而增強(qiáng)，實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)穩(wěn)定溫度。血液樣品因信號(hào)強(qiáng)度較弱，適宜內(nèi)標(biāo)法實(shí)驗(yàn)。 3.研究了人體唾液樣品儲(chǔ)存與制備條件對(duì)NMR譜圖的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明4℃儲(chǔ)存不利于唾液樣品穩(wěn)定，若須長期儲(chǔ)存應(yīng)選擇低于-25℃環(huán)境；NaF能在短期起到防腐作用，但不適用于長期儲(chǔ)存；磷酸鹽緩沖液濃度對(duì)唾液中的酸性物質(zhì)的化學(xué)位移影響