一種新型撞擊型脊髓打擊器的創(chuàng)制與應用評價.pdf

1、目的:研制一種操作性強,重復性高,經(jīng)濟實用的撞擊型脊髓損傷打擊器,為脊髓損傷機制及治療研究提供可靠的動物模型制備裝置。
　　方法:⑴大鼠脊髓損傷撞擊器的制作:撞擊器由撞擊裝置和固定支架構成。撞擊裝置由撞擊頭和套管組成,撞擊頭的制作:取5 ml注射器,將其下端全部剪下,與10 g砝碼底部相接,砝碼上端系一細繩;套管的制作:取10 ml注射器,將注射器頭端剪除,修剪注射器頭端至可容納5 ml注射器頭大小為宜。固定支架由木條制作而成,由

2、支撐支架及移動支架組成。支撐支架支撐移動支架,撞擊器套管固定于移動支架上。
　?、拼笫蠹顾枳矒粜蛽p傷模型的制備:取成年SD大鼠100只,體重200~250 g,隨機分為3個模型組(A1、A2和A3組),1個假手術組(B組),每組選取25只大鼠。利用新型撞擊型脊髓打擊器建立大鼠脊髓損傷模型:將大鼠T9-11段脊椎椎弓移除,取10g砝碼,分別自2cm高度(A1組)、3cm高度(A2組)和4cm高度(A3組)自由下落對脊髓進行撞擊;假手

3、術組(B組)僅移除大鼠T9-11段脊椎椎弓,對脊髓不進行任何手術處理。
　?、谴笫蠹顾钃p傷后行為學評價:
　　1)斜板實驗:模型組分別于術前1d,術后3d、7d、14d、28d,每個時間點隨機選取5只大鼠進行斜板實驗,將大鼠身體長軸與斜板縱軸呈垂直位放置,以大鼠能夠停留5s的最大角為其功能值,連續(xù)測量3次,取平均值。
　　2)BBB評分:進行完斜板實驗的大鼠立刻進行BBB運動功能評價。
　?、却笫蠹顾钃p傷后組織形

4、態(tài)學觀察:將進行完行為學評價的大鼠進行多聚甲醛心臟灌注,取固定好的脊髓,自損傷中心橫斷至兩端,分別用于HE染色和電鏡觀察。
　　結果:⑴大鼠脊髓損傷后行為學評價假手術組于各時間點觀察,斜板實驗評價與BBB評分未見差異。2 cm高度下落撞擊損傷組(A1組)術后3 d,斜板實驗結果為(26.3±1.75)o,BBB評分為0.40±0.55。隨時間延長至術后28 d,斜板實驗結果為(56.20±1.30)o,BBB評分為15.40±1.

5、82,評價結果明顯呈增大趨勢(P<0.05);3 cm高度下落撞擊損傷組(A2組)術后3 d,斜板實驗結果為(28.00±1.58)o,大鼠BBB評分為0.20±0.45。術后7 d斜板實驗結果為(37.80±1.79)o,至術后28 d其結果未見明顯差異(P>0.05),術后28 d BBB評分為5.40±0.55,較術后3 d有明顯提升(P<0.05)。4 cm高度下落撞擊損傷組(A3組)術后3 d,斜板實驗結果為(26.80±0.

6、84)o,BBB評分為0.20±0.45。術后7 d,斜板實驗結果為(34.20±0.84)o,較術后28 d未見明顯差異(P>0.05),術后28 d BBB評分為5.20±0.84,與術后3 d相比有明顯提升(P<0.05)。
　?、拼笫蠹顾钃p傷后組織形態(tài)學觀察:
　　1)HE染色觀察:
　?、偌偈中g組于各時間點HE染色顯示脊髓內(nèi)部結構完整,神經(jīng)元形態(tài)規(guī)則,組織間隙正常,神經(jīng)纖維排列緊密;
　　②2 cm高度

7、下落撞擊損傷組(A1組)術后3 d, HE染色顯示脊髓組織出現(xiàn)少量出血灶,白質(zhì)神經(jīng)纖維排列紊亂,有空洞形成。隨時間延長脊髓組織出血逐漸消失。灰、白質(zhì)結構破壞在術后7 d時最為嚴重。術后14 d至28 d,灰、白質(zhì)結構有所恢復,神經(jīng)纖維排列較為規(guī)整。
　?、?cm高度下落撞擊損傷組(A2組)術后3 d,HE染色結果顯示,脊髓組織見大量出血灶,灰質(zhì)內(nèi)細胞間隙增大,白質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)空洞,神經(jīng)纖維排列疏松。隨時間延長脊髓組織內(nèi)出血逐漸消失,缺失

8、組織逐漸增多,神經(jīng)元數(shù)量減少,白質(zhì)結構紊亂。至術后14 d,灰質(zhì)殘留組織少,白質(zhì)結構排列紊亂。至術后28 d,灰質(zhì)有部分神經(jīng)元恢復,白質(zhì)排列較14 d時明顯整齊。
　?、? cm高度下落撞擊損傷組(A3組)術后3 d, HE染色結果顯示脊髓組織內(nèi)見大量出血灶,灰質(zhì)內(nèi)細胞間隙增大,白質(zhì)內(nèi)組織結構排列稀疏,有空洞形成?；摇踪|(zhì)交界不清晰。隨時間延長至術后28 d,脊髓組織內(nèi)出血逐漸消失,灰質(zhì)壞死區(qū)域逐漸加重,白質(zhì)結構紊亂加重,最終僅見

9、少量殘留組織。
　　2)電鏡結果觀察:
　?、偌偈中g組于各時間點電鏡觀察髓鞘板層結構致密,軸突結構未見異常,線粒體清晰可見。
　　②2 cm高度下落撞擊損傷組(A1組)電鏡結果顯示,術后3 d髓鞘板層出現(xiàn)部分松解,軸突結構較完整,線粒體清晰可見。隨時間延長,髓鞘板層松解加重,軸突萎縮,線粒體逐漸消失。
　?、? cm高度下落撞擊損傷組(A2組)電鏡結果顯示術后3 d,髓鞘板層松解,軸突及線粒體模糊,隨時間延長,髓

10、鞘板層松解逐漸加重,軸突逐漸萎縮直至消失,髓鞘結構完全消失。
　　④4 cm高度下落撞擊損傷組(A3組)電鏡結果顯示術后3 d,髓鞘板層嚴重松解,出現(xiàn)折疊現(xiàn)象,軸突萎縮,未見線粒體。隨時間延長髓鞘板層松解逐漸加重,軸突消失。至術后28 d,髓鞘結構徹底消失。
　　結論:⑴自制撞擊型脊髓打擊器在不同高度對脊髓進行撞擊所造成的損傷,隨高度的增加脊髓損傷程度逐漸加重。
　?、票狙b置自3 cm以上下落高度對脊髓進行撞擊,可造成