MEG3-miR-770-5P-ARPC2通路在上皮性卵巢癌發(fā)病機(jī)制中的初步研究.pdf

1、上皮性卵巢癌（Epithelial ovarian cancer，EOC）發(fā)病隱匿，通常發(fā)現(xiàn)時(shí)大部分已是晚期且有轉(zhuǎn)移。眾所周知，異常的細(xì)胞增殖和遷移與腫瘤的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，促進(jìn)了這一疾病的發(fā)生與進(jìn)展。長鏈非編碼RNA MEG3（母系表達(dá)的基因3）已經(jīng)被報(bào)道能通過影響細(xì)胞遷移和增殖參與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展，其機(jī)制主要是通過P53途徑或DNA甲基化，但目前并而沒有證據(jù)表明可以以宿主基因的功能在腫瘤發(fā)病機(jī)理發(fā)揮作用。最近的一項(xiàng)研究報(bào)道了MEG3在

2、上皮性卵巢癌中的功能，但沒有研究關(guān)注它的功能在其下游基因的受體。我們研究組通過Quantitative RT-PCR(qRT-PCR)檢測了上皮性卵巢癌與卵巢良性腫瘤中MEG3的miRNA表達(dá)，發(fā)現(xiàn)EOC實(shí)驗(yàn)組較對照組低表達(dá)，存在顯著差異。本研究以MEG3為研究出發(fā)點(diǎn)，檢索了pubmed、ensembl等生物信息網(wǎng)站，發(fā)現(xiàn)MEG3基因序列最后面的內(nèi)含子編碼進(jìn)化上高度保守miR-770-5p，為此探討其MEG3作為宿主基因通過miR-77

3、0-5p參與上皮性卵巢癌發(fā)病機(jī)制的可能性。
　　我們通過生物信息學(xué)軟件預(yù)測miR-770-5p的靶基因，發(fā)現(xiàn)ARPC2是其潛在靶基因。應(yīng)用Quantitative RT-PCR(qRT-PCR)、Western Blot技術(shù)檢測miR-770-5p及其潛在靶基因ARPC2在上皮性卵巢癌中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)miR-770-5p在上皮性卵巢癌中呈現(xiàn)顯著性低表達(dá)，而其靶基因ARPC2呈現(xiàn)顯著高表達(dá)。同時(shí)，我們選用卵巢癌相關(guān)細(xì)胞株OMC685與

4、HEY細(xì)胞作為體外實(shí)驗(yàn)研究細(xì)胞，降低體外細(xì)胞中MEG3的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的遷移和增殖能力增強(qiáng)。應(yīng)用雙熒光素酶報(bào)告基因試驗(yàn)體外驗(yàn)證miR-770-5p和其靶基因ARPC2的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)miR-770-5p確實(shí)是和ARPC23'端未翻譯區(qū)(3' untranslated region，3'UTR)結(jié)合。將miR-770-5p inhibitor（miR-770-5p抑制子）轉(zhuǎn)染到細(xì)胞，使miR-770-5p呈低表達(dá)水平，然后檢測ARPC2的表達(dá)

5、，發(fā)現(xiàn)其呈現(xiàn)高表達(dá)水平，且細(xì)胞的遷移和增殖能力也同樣增強(qiáng)。通過RNA干擾(RNA interference， RNAi)技術(shù)抑制體外細(xì)胞株中ARPC2的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的遷移和增殖能力都得到了部分抑制。通過本研究我們可以得出以下信息:由于宿主基因MEG3的低表達(dá)影響了miR-770-5p的表達(dá)水平，從而使其靶基因ARPC2呈現(xiàn)高表達(dá)，這條信號通路的改變抑制了細(xì)胞的遷移和增殖能力，從而在上皮性卵巢癌的發(fā)生中可能發(fā)揮一定的作用。
　　綜