病毒性心肌炎CTGF表達(dá)與心肌纖維化相關(guān)性研究.pdf

1、斷，但對炎癥細(xì)胞浸潤程度有不同理解。本實(shí)驗(yàn)通過觀察不同程度心肌炎與正常心肌中Ⅰ、Ⅲ型膠原改變情況，再測定CTGF和TGF—β1的表達(dá)差異，希冀尋找一種簡單、有效的指標(biāo)和方法來確診不典型病毒性心肌炎，并從心肌纖維化角度探討病毒性心肌炎死亡機(jī)制。 目的： 本實(shí)驗(yàn)假定CTGF作為TGF—β1的下游調(diào)節(jié)因子在VM心肌纖維化中起著核心作用，即各種原因?qū)е耇GF—β1升高進(jìn)而上調(diào)CTGF的表達(dá)，CTGF作為終末作用因子促進(jìn)膠原合成。

2、為達(dá)此目的，我們觀察VM心肌中Ⅰ、Ⅲ型膠原的變化情況，并檢測CTGF和TGF—β1在心肌組織中的表達(dá)，探討CTGF對心肌膠原變化的影響和TGF—β1對CTGF的調(diào)節(jié)作用。為尋找VM心肌纖維化機(jī)制、防止其進(jìn)展為擴(kuò)張性心肌病提供新思路；同時(shí)為VM的法醫(yī)病理學(xué)診斷、死因分析提供輔助檢測手段和理論依據(jù)。 材料與方法： 1.研究對象 篩選中山大學(xué)法醫(yī)鑒定中心2004年～2008年的尸體解剖案例中符合本課題設(shè)計(jì)要求的30例心

3、臟標(biāo)本，其中男性13例，女性17例，年齡介于19-40歲。研究對象分為實(shí)驗(yàn)組和對照組，實(shí)驗(yàn)組根據(jù)Dallas標(biāo)準(zhǔn)又分為明確性心肌炎組(10例)和界限性心肌炎組(10例)，對照組為正常心肌組(10例)。 2.實(shí)驗(yàn)方法 2.1采用天狼猩紅—飽和苦味酸染色法觀察各組心肌中總膠原和Ⅰ、Ⅲ型膠原在蛋白水平的變化，并采用RT—PCR法檢測Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA在轉(zhuǎn)錄水平的變化，并對各組膠原表達(dá)差異進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 2.2應(yīng)用免

4、疫組化法檢測各組心肌組織中CTGF和TGF—β1的表達(dá)和分布。 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 所有數(shù)據(jù)輸入SPSS13.0計(jì)算機(jī)系統(tǒng)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。多組均數(shù)比較采用單因素方差分析法，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；組間變量采用Pearson積矩相關(guān)系數(shù)行相關(guān)性分析，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1.明確性心肌炎組、界限性心肌炎組及正常對照組心肌總膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF)均值分別為32.98±2.93％、19.49±1

5、.71％、10.94±1.41％，三組總膠原CVF有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；明確性心肌炎組和界限性心肌炎組心?、?、Ⅲ型膠原含量均升高，兩組Ⅰ、Ⅲ型膠原比值均數(shù)分別為7.73±1.56、7.89±1.17，與正常對照組Ⅰ、Ⅲ型膠原比值均數(shù)(7.62±1.53)比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。 2.本實(shí)驗(yàn)證實(shí)應(yīng)用改良的Trizol法可從石蠟包埋的組織中提取到高純度RNA(280nm與260nm吸光度比值介于1.6～1.8之間)

6、；但隨后電泳顯示大部分檢材中總RNA過度降解。換用較新鮮心肌組織(死后-10℃～0℃保存5天左右)，出現(xiàn)同樣實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 3.明確性心肌炎組和界限性心肌炎組中CTGF的表達(dá)較正常心肌組顯著升高(三組PU值均數(shù)分別為18.19±2.45、10.22±1.21和6.46±2.09)(P<0.05)；明確性心肌炎組中CTGF表達(dá)和總膠原含量成正相關(guān)關(guān)系(r為0.76)；界限性心肌炎組和正常對照組中CTGF表達(dá)與總膠原含量無明顯相關(guān)。

7、 4.明確性心肌炎組和界限性心肌炎組中TGF—β1表達(dá)均高于正常心肌組(三組PU值均數(shù)分別為15.28±2.45、8.57±1.21和5.15±2.09)(P<0.05)；明確性心肌炎組中CTGF表達(dá)與TGF—β1成正相關(guān)(r為0.69)，且二者分布極為相似；界限性心肌炎組和對照組中CTGF的表達(dá)與TGF—β1無明顯相關(guān)。 結(jié)論： 1.明確性心肌炎組和界線性心肌炎組心肌均存在不同程度的纖維化，且前者纖維化程度重于后者

8、；心肌纖維化可致心電功能紊亂和心肌舒縮功能障礙，可能是患者猝死的重要原因之一；實(shí)驗(yàn)組Ⅰ、Ⅲ型膠原比值與正常對照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說明總膠原含量升高來源于Ⅰ、Ⅲ型膠原同時(shí)升高，且二者升高幅度近似。 2.本實(shí)驗(yàn)證實(shí)應(yīng)用改良Trizol法可從石蠟包埋的組織中提取到高純度RNA；隨后實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)-10℃～0℃保存5天左右心肌組織在石蠟包埋前總RNA大部分已降解，不適合采用RT—PCR技術(shù)進(jìn)行檢測。 3.明確性心肌炎組CTGF表達(dá)上

9、調(diào)，其含量與總膠原含量成正相關(guān)關(guān)系，提示CTGF通過同時(shí)上調(diào)Ⅰ、Ⅲ型膠原合成來參與病毒性心肌炎心肌纖維化進(jìn)程。 4.明確性心肌炎組TGF—β1表達(dá)上調(diào)，其含量與CTGF成正相關(guān)關(guān)系，且二者在分布上極為相似，提示TGF—β1通過正調(diào)節(jié)CTGF的表達(dá)進(jìn)而參與心肌纖維化進(jìn)程。CTGF可能作為促進(jìn)膠原合成的終末作用因子參與心肌纖維化，其確切機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。 綜上所述，明確性心肌炎和界線性心肌炎組中總膠原含量、CTGF及TG