腦出血后TLR4信號(hào)途徑介導(dǎo)炎癥性腦損傷機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景：
　　腦出血(Intracerebral hemorrhage，ICH)是一種嚴(yán)重的腦血管疾病，是神經(jīng)科常見(jiàn)疾病，其發(fā)病率、致死率、致殘率均較高，嚴(yán)重危害人類(lèi)的健康和生存，并給社會(huì)和家庭帶來(lái)極大的危害和沉重的負(fù)擔(dān)。近年研究發(fā)現(xiàn)，腦出血發(fā)生后，并不僅僅是血腫對(duì)神經(jīng)組織產(chǎn)生破壞和壓迫作用，出血后伴隨發(fā)生的血腫周?chē)X組織水腫、缺血及凋亡等繼發(fā)損傷過(guò)程，可以加重神經(jīng)細(xì)胞的損害，使患者病情繼續(xù)惡化，甚至死亡。但對(duì)于上述腦出血后繼發(fā)神經(jīng)

2、損傷的機(jī)制國(guó)內(nèi)外研究均較少，臨床上對(duì)于腦出血的治療仍局限于降顱壓、手術(shù)清除血腫或神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)藥物等，對(duì)于繼發(fā)的神經(jīng)損傷則缺乏行之有效的防治措施。
　　Toll樣受體(Toll-like receptor，TLRs)是一種在進(jìn)化上高度保守的模式識(shí)別受體家族，目前在哺乳動(dòng)物中已發(fā)現(xiàn)13個(gè)成員，分別通過(guò)MyD88依賴及非依賴通路發(fā)揮生物學(xué)作用。TLR4是目前為止唯一既能通過(guò)MyD88依賴通路也能通過(guò)MyD88非依賴通路發(fā)揮作用的TLRs。T

3、LR4通過(guò)MyD88依賴途徑可誘導(dǎo)IRAK磷酸化，啟動(dòng)NF-κB的激活;通過(guò)MyD88非依賴途徑既可誘導(dǎo)IRF3磷酸化又可以引起NF-κ B的遲發(fā)激活。已有研究表明，TLR4在阿爾茲海默病、多發(fā)性硬化、腦梗塞等多種中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中發(fā)揮重要作用。近年通過(guò)對(duì)TLR4基因敲除小鼠的研究也證實(shí)TLR4確與腦出血后血腫周?chē)难装Y反應(yīng)相關(guān)，但是TLR4如何發(fā)揮作用，以及通過(guò)哪種途徑引起腦組織的損傷，至今仍不清楚。
　　目的：
　　觀察

4、小鼠腦出血后血腫周?chē)牟±砀淖兗癟LR4、p-IRAK1、p-IRF3、NF-κ B蛋白的表達(dá)情況，探討TLR4及MyD88依賴及非依賴通路激活情況，分析腦出血后炎癥損傷的重要原因，尋求腦出血治療的新靶點(diǎn)。
　　方法：
　　自體股動(dòng)脈血15μl注入紋狀體建立小鼠腦出血模型，HE染色及尼氏染色觀察腦出血后血腫周?chē)X組織的病理改變，TUNEL染色觀察血腫周?chē)X組織細(xì)胞凋亡情況，Western blot法檢測(cè)血腫周?chē)X組織TLR4

5、、p-IRAK1、p-IRF3、NF-κ B-p65蛋白表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化。
　　結(jié)果：
　　1、小鼠腦出血造模成功率72.7％。檢查時(shí)可發(fā)現(xiàn)小鼠左前肢無(wú)力，行走時(shí)向左側(cè)旋轉(zhuǎn)甚至向左側(cè)跌倒，提尾時(shí)左前爪不能伸直等神經(jīng)功能缺損體征。神經(jīng)功能評(píng)分1-4分提示造模成功。
　　2、腦出血后6h血腫周?chē)霈F(xiàn)TUNEL染色陽(yáng)性細(xì)胞，以膠質(zhì)細(xì)胞為主;出血后3d陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)達(dá)到高峰，以神經(jīng)元為主;7d后逐漸減少。各監(jiān)測(cè)時(shí)間點(diǎn)均高于相應(yīng)生理鹽

6、水組(P＜0.05)。
　　3、TLR4蛋白表達(dá)在腦出血后6h開(kāi)始增多，3d達(dá)到高峰，7d后略減少。與生理鹽水組各應(yīng)時(shí)間點(diǎn)有顯著差異(P＜0.05)。
　　4、NF-κ B p65蛋白表達(dá)在腦出血后6h開(kāi)始增多，之后逐漸增加，1d-3d維持在較高水平，7d后減少。與生理鹽水組各應(yīng)時(shí)間點(diǎn)有顯著差異(P＜0.05)。
　　5、p-IRAK1蛋白表達(dá)在腦出血后6h開(kāi)始增多，3d達(dá)到高峰，7d后顯著減少。與生理鹽水組各應(yīng)時(shí)間點(diǎn)

7、有顯著差異(P＜0.05)。
　　6、p-IRF3蛋白表達(dá)在腦出血后逐漸增多，但6h的蛋白表達(dá)量與鹽水對(duì)照組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)無(wú)顯著差異(P＞0.05)，其余時(shí)間點(diǎn)差異顯著(P＜0.05)。
　　7、腦出血后血腫周?chē)鷓-IRAK1蛋白表達(dá)和NF-κ Bp65蛋白表達(dá)正相關(guān)(r=0.959，p＜0.01)。
　　結(jié)論：
　　1、TLR4及NF-κ B p65蛋白的表達(dá)都在腦出血后6h開(kāi)始升高，3d達(dá)到高峰，7d后減少，提示