自身免疫性肝炎和原發(fā)性膽汁性肝硬化血清代謝組學初步研究.pdf

1、研究背景:
　　 自身免疫性肝炎(AIH)和原發(fā)性性膽汁性肝硬化(PBC)因臨床表現(xiàn)的不典型及常有重疊綜合征的發(fā)生，臨床診斷尚存在很多困難，發(fā)病機制未明，缺乏特異性化驗手段，確診均需創(chuàng)傷性肝臟穿刺，故尋找其他研究自身免疫性肝病的機制和診斷方法的可能性就顯得尤為重要。
　　 肝臟為人體最主要的代謝器官，是三大物質(zhì)代謝的樞紐。肝臟如果有病理生理改變，與之相關(guān)的代謝勢必會產(chǎn)生相應的變化。代謝組學是屬于系統(tǒng)生物學研究的新平臺，是

2、通過研究生物體系受到各種擾動后各種代謝物質(zhì)發(fā)生的變化研究生命體。代謝組學研究中較常用的方法包括核磁共振(NMR)、氣相色譜-質(zhì)譜(GC/MS)、液相色譜-質(zhì)譜(LC/MS)。其中超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(UPLC)因為高效、靈敏等優(yōu)點，得到越來越多地的應用。代謝組學目前已在一些疾病的診斷、發(fā)病機制、預后判斷上得到初步研究應用，如在腎細胞癌，膽管癌，食管癌以及糖尿病的診斷中表現(xiàn)優(yōu)秀。
　　 本研究運用以UPLC/MS為基礎的血

3、液代謝組學研究方法對AIH和PBC的患者進行了血液代謝組學的初步研究。通過研究自身免疫性肝炎(AIH)、原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)患者與正常人間的血液代謝譜差異，尋找潛在的生物標記物；為臨床診斷提供新的思路和方法，并嘗試建立AIH與PBC的代謝組學鑒別診斷模型。
　　 方法：選擇臨床診斷為AIH19例和PBC20例患者及正常健康人25例，應用非靶向的線性梯度超高效液相色譜質(zhì)譜系統(tǒng)檢測血清中的小分子代謝物質(zhì)。對超高效液相色譜-質(zhì)

4、譜(UPLC/MS)的檢測數(shù)據(jù)進行多變量數(shù)據(jù)分析，建立AIH和PBC鑒別診斷模型，并驗證診斷模型的效力。篩選生物標記物，并分析各組血清中生物標志物的變化情況。
　　 結(jié)果：在負離子模式下自身免疫性肝炎和原發(fā)性膽汁性肝硬化的代謝圖譜明顯不同，構(gòu)建了可以鑒別診斷AIH和PBC的代謝組學偏最小二乘模型(PLS)，該模型解釋能力和預測能力都很好(R2Y=0.991，Q2=0.943)，ROC曲線下面積為1，包括4例AIH，4例PBC，4

5、例AIH-PBC重疊綜合癥患者在內(nèi)的外部驗證結(jié)果顯示，AIH及PBC組分組完全正確，且AIH-PBc重疊癥標本位于單獨的區(qū)域。共鑒定出了6類生物標記物：膽汁酸(bileacids)，溶血卵磷脂(lysophosphatidylcholine，LPC)，卵磷脂(phosphatidylcholine，PC)，鞘磷脂(sphingomyelin，SM)，游離脂肪酸(freefattyacids，F(xiàn)FA)，苯丙氨酸(Phenylalanine

6、)。膽汁酸在疾病組血清含量升高，LPC，PC，SM，F(xiàn)FA在疾病組降低，PBC血清中以上物質(zhì)改變程度高于AIH，AIH-PBC重疊癥組物質(zhì)的改變介于AIH與PBC之間。苯丙氨酸僅在AIH組中較健康對照組升高有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)論：通過對自身免疫性肝炎患者、原發(fā)性膽汁性肝硬化患者和健康人群血清進行代謝組學研究，結(jié)合多變量統(tǒng)計分析方法，發(fā)現(xiàn)代謝組學技術(shù)對自身免疫性肝病的診斷及機制研究具有一定的幫助，是一種值得引起重視的研究疾病診