人源M2三聯(lián)體靶抗原的克隆表達(dá)及其在原發(fā)性膽汁性肝硬化中的應(yīng)用.pdf_第1頁(yè)
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1、該研究設(shè)計(jì)克隆表達(dá)了一抗原蛋白三聯(lián)體,命名為BPO,它包含了M2抗體識(shí)別的人源BCOADC-E2、PDC-E2、OGDC-E2的抗原表位片斷.該研究工作共分三個(gè)部分：一、PBC特異性M2抗體靶抗原及其三聯(lián)體的克隆表達(dá)與鑒定;從人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）中抽提細(xì)胞總RNA,逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA,以此作為模板,PCR法擴(kuò)增PDC-E2內(nèi)側(cè)硫辛酰區(qū)和部分外側(cè)硫辛酰區(qū),BCOADC-E2和OGDC-E2的硫辛酰區(qū).擴(kuò)增產(chǎn)物用相應(yīng)限制性內(nèi)切酶酶

2、切后純化,定向克隆入表達(dá)載體pQE-30.對(duì)插入載體的目的基因進(jìn)行測(cè)序.二、PBC免疫學(xué)診斷方法的建立 我們將N端融合有六個(gè)組氨酸殘基的重組蛋白,用Ni-NTA親和層析柱,在變性條件下進(jìn)行純化,然后透析除去變性劑,以使重組蛋白復(fù)性.利用純化得到的BPO,建立了Westen-blot法與ELISA法.ELISA法的的批內(nèi)、批間變異系數(shù)均小于10﹪.85例陰性對(duì)照血清的OD值為0.073±0.046.陽(yáng)性臨界值定為0.303（陰性平均OD值

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