PF對TNF-a誘導的HaCaT細胞增殖、STAT-3激活及MMP-2、VEGF分泌的影響.pdf

1、芍藥苷是毛銀科植物芍藥的根部提取物,藥理作用廣泛,主要有抗炎、調節(jié)免疫、護腎、護肝、抗抑郁及影響細胞增殖等作用,占白芍總苷的90％。臨床研究發(fā)現(xiàn)白芍總苷對銀屑病治療有確切的療效。
　　銀屑病是一種慢性炎癥性、增生性皮膚病,好發(fā)于中青年,病情頑固,反復發(fā)作并進行性加重,對人體構成了很大危害。其組織病理主要表現(xiàn)為角質形成細胞(keratinocyte,KC)過度增殖和分化異常,炎癥細胞浸潤和真皮毛細血管增生,延長,遷曲和擴張。STAT

2、-3參與細胞內信號傳遞,在細胞因子網(wǎng)絡調節(jié)中發(fā)揮重要作用,調控眾多的細胞因子和炎癥介質的基因表達,調節(jié)免疫反應,參與銀屑病發(fā)病。因此,STAT-3是銀屑病治療的一個重要靶點。
　　本論文的主要目的是研究芍藥苷在體外對STAT-3激活及STAT-3激活后引起的細胞增殖,及下游細胞因子MMP-2,VEGF分泌增加的影響,以期從STAT-3的新角度闡明芍藥苷的作用機制,為芍藥苷在臨床上應用于銀屑病及表皮增殖性皮膚病的治療提供基礎和實驗依

3、據(jù)。
　　針對以上研究目的,設計實驗、結果如下:
　?、賂NF-a誘導HaCaT細胞增殖,STAT-3激活及MMP-2、VEGF的分泌:用TNF-a10ng/ml誘導HaCaT細胞,倒置顯微鏡觀察HaCaT細胞的形態(tài)變化,刺激組細胞較正常對照組比,細胞數(shù)量明顯增多,細胞形態(tài)無明顯差別;MTT比色法檢測細胞增殖率發(fā)現(xiàn),TNF-a刺激后細胞顯著增殖,達201%。用western-blot檢測激活的STAT-3(p-STAT-3)

4、,發(fā)現(xiàn)經(jīng)未經(jīng)刺激無p-STAT-3表達,TNF-a刺激后p-STAT-3表達明顯;熒光定量PCR檢測STAT-3mRNA及激活的STAT-3下游細胞因子MMP-2,VEGF的mRNA的表達,結果發(fā)現(xiàn)刺激后STAT-3mRNA表達無明顯改變,MMP-2,VEGF表達明顯增強。
　?、谏炙庈諏NF-a誘導的HaCaT細胞增殖、STAT-3激活及MMP-2、VEGF的分泌的影響:設計實驗組干預組為濃度梯度組和時間梯度組。倒置顯微鏡觀察

5、濃度組和時間組HaCaT細胞的形態(tài)的變化,各濃度和時間組細胞形態(tài)均正常,各濃度組間無明顯差別,與TNF-a刺激比,細胞密度稍稀疏,干預24h后最明顯;MTT比色法檢測芍藥苷干預對經(jīng)TNF-a刺激后的HaCaT細胞的增殖的抑制情況,結果發(fā)現(xiàn)芍藥苷對誘導后HaCaT細胞增殖抑制率呈時間和濃度依賴性;western-blot法檢測各濃度對激活的STAT-3(p-STAT-3)的變化,結果發(fā)現(xiàn)各濃度對激活的STAT-3無明顯逆轉作用;熒光定量P