從“心藏神”探討《內(nèi)經(jīng)》睡眠理論及天王補(bǔ)心丹干預(yù)老年失眠大鼠作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：本研究通過對《內(nèi)經(jīng)》睡眠理論進(jìn)行總結(jié)歸納，認(rèn)為睡眠是以神的活動(dòng)為綱紀(jì)，營衛(wèi)二氣的運(yùn)行出入為樞機(jī)，陰陽蹺脈的氣血流注為兆始，五臟生理功能(藏精化氣生神)為根柢的重要生命活動(dòng)。心藏神，指心有統(tǒng)帥全身臟腑、經(jīng)絡(luò)、形體、官竅的生理活動(dòng)和主司精神、意識、思維、情志等心理活動(dòng)的功能?！端貑枴れ`蘭秘典論》：“心者，君主之官，神明出焉”。《內(nèi)經(jīng)》認(rèn)為睡眠由心神主導(dǎo)和控制，老年失眠病位在心，心神失養(yǎng)或心神不寧是其主要病機(jī)，養(yǎng)心安神是其主要治法。本實(shí)

2、驗(yàn)在D-半乳糖制作亞急性衰老模型基礎(chǔ)上，采用咖啡因腹腔注射疊加多平臺(tái)水環(huán)境持續(xù)睡眠剝奪法制作老年失眠大鼠模型，通過觀察老年失眠大鼠發(fā)病過程中呼吸頻率、心率等指標(biāo)變化、學(xué)習(xí)記憶能力、內(nèi)分泌激素的晝夜節(jié)律、心肌超微結(jié)構(gòu)，肽能神經(jīng)元的表達(dá)(VIP、AVP)以及VIPmRNA、AVPmRNA表達(dá)等實(shí)驗(yàn)研究，探討VIP、AVP在調(diào)節(jié)老年失眠睡眠-覺醒機(jī)制中的作用，以及天王補(bǔ)心丹調(diào)節(jié)睡眠-覺醒機(jī)制的可能作用途徑。
　　 方法：將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)

3、分成4組：空白對照組、模型組、天王補(bǔ)心丹組、艾司唑侖組。120mg.kg-1.d-1標(biāo)準(zhǔn)頸背部皮下注射D-半乳糖28d制作衰老模型，120mg.kg-1.d-1標(biāo)準(zhǔn)頸背部皮下注射D-半乳糖疊加腹腔注射30mg.kg-1.d-1咖啡因7d，運(yùn)用自制造模裝置進(jìn)行多平臺(tái)水環(huán)境法進(jìn)行睡眠剝奪7d，建立老年失眠大鼠模型。具體檢測方法如下：
　　 1.觀察動(dòng)物睡眠情況、活動(dòng)量、精神狀況、雙目、口唇、爪甲、皮毛等一般情況及測量呼吸頻率、心率、

4、血壓、力竭性游泳時(shí)間、血液血紅蛋白總數(shù)、血紅蛋白濃度、攝食量、體重、耳溫等一般情況；
　　 2.運(yùn)用Morris水迷宮檢測大鼠學(xué)習(xí)記憶能力；
　　 3.放射免疫法測定大鼠血漿ACTH、Cort、TSH、GH等4種內(nèi)分泌激素，采用群體余弦法分析晝夜節(jié)律變化；
　　 4.透射電鏡檢測大鼠心肌超微結(jié)構(gòu)；
　　 5.免疫組織化學(xué)方法檢測心臟和SCN中VIP、AVP表達(dá)；
　　 6.RT-PCR檢測心臟和S

5、CN中VIPmRNA、AVPmRNA表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.模型組動(dòng)物時(shí)有呵欠，打瞌睡，精神萎靡，活動(dòng)量少，多數(shù)動(dòng)物目光呆滯，雙目、口唇呈蒼白色，少數(shù)呈淡粉紅色，皮毛重度枯槁蓬亂，呈淡象牙色，濕透，爪甲粗糙，抓取時(shí)無力反抗；天王補(bǔ)心丹組動(dòng)物白天時(shí)有呵欠，精神稍萎靡，雙目、口唇呈白色，爪甲粗糙，皮毛略枯槁蓬亂，抓取時(shí)反抗較劇。模型組與空白對照組比較，呼吸頻率顯著加快(P＜0.01)，心率明顯加快(P＜0.01)，收

6、縮壓顯著升高(P＜0.01)，力竭性游泳時(shí)間顯著縮短(P＜0.01)，外周血紅細(xì)胞總數(shù)顯著減少(P＜0.01)，外周血紅蛋白濃度顯著降低(P＜0.01)，攝食量顯著減少(P＜0.01)，體重顯著減輕(P＜0.01)，耳溫顯著升高(P＜0.01)；天王補(bǔ)心丹組與模型組比較，呼吸頻率顯著降低(P＜0.01)，心率顯著減慢(P＜0.01)，收縮壓降低(P＜0.05)，力竭性游泳時(shí)間顯著延長(P＜0.01)，外周血紅細(xì)胞總數(shù)顯著增加(P＜0.0

7、1)，外周血紅蛋白濃度顯著升高(P＜0.01)，攝食量顯著增加(P＜0.01)，體重增加(P＜0.05)，耳溫顯著降低(P＜0.01)；艾司唑侖組與模型組比較，呼吸頻率顯著降低(P＜0.01)，心率減慢但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，收縮壓降低(P＜0.05)，力竭性游泳時(shí)間顯著延長(P＜0.01)，外周血紅細(xì)胞總數(shù)和血紅蛋白濃度增加，但均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，攝食量增加(P＜0.05)，體重增加但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，

8、耳溫降低(P＜0.05)。天王補(bǔ)心丹總體效果優(yōu)于艾司唑侖。
　　 2.模型組與空白對照組比較，潛伏期時(shí)間顯著延長(P＜0.01)，平臺(tái)象限的游泳距離占總距離百分比顯著降低(P＜0.01)，池壁20％和40％區(qū)域游泳距離百分比顯著升高(P＜0.01)，跨過原平臺(tái)位置次數(shù)顯著下降(P＜0.01)；天王補(bǔ)心丹組、艾司唑侖組與模型組比較，潛伏期時(shí)間顯著縮短(P＜0.01)，平臺(tái)象限的游泳距離占總距離百分比顯著升高(P＜0.01)，池壁2

9、0％和40％區(qū)域游泳距離百分比顯著降低(P＜0.01)，跨過原平臺(tái)位置次數(shù)顯著增加(P＜0.01)。天王補(bǔ)心丹總體效果優(yōu)于艾司唑侖。
　　 3.模型組與空白對照組比較，ACTH、Cort活性存在晝夜節(jié)律波動(dòng)(P＜0.05，P＜0.001)，但ACTH峰值相位提前，振幅縮小，Cort峰值相位推后，振幅增加，TSH、GH活性晝夜節(jié)律均消失(P＞0.05，P＞0.05)；天王補(bǔ)心丹組與空白對照組比較，ACTH、Cort、GH活性亦存在

10、明顯地晝夜節(jié)律(P＜0.001，P＜0.05，P＜0.001)，ACTH峰值相位推后，振幅減小，Cort峰值相位提前，振幅減小，GH峰值相位提前，振幅減小，但TSH晝夜節(jié)律消失(P＞0.05)；艾司唑侖組與空白對照組比較，ACTH、Cort活性晝夜節(jié)律消失(P＞0.05)，TSH、GH活性存在晝夜波動(dòng)(P＜0.05，P＜0.001)，TSH活性峰值相位提前，振幅增加，GH活性峰值相位提前，振幅減小。天王補(bǔ)心丹總體效果優(yōu)于艾司唑侖。

11、>　　 4.模型組與空白對照組比較，心肌肌絲排列紊亂、斷裂，肌小節(jié)排列紊亂、斷裂，少數(shù)細(xì)胞核可見濃縮變小，染色質(zhì)輕度溶解及凝聚，核膜皺縮尚完整。線粒體嵴結(jié)構(gòu)模糊。肌漿網(wǎng)囊性擴(kuò)張，成大囊泡狀；天王補(bǔ)心丹組少數(shù)細(xì)胞核有輕度損傷，染色質(zhì)輕度溶解及凝聚，核膜尚完整。肌漿網(wǎng)囊性擴(kuò)張，成大囊泡狀?？梢娚贁?shù)線粒體嵴結(jié)構(gòu)模糊；艾司唑侖組大部分心肌細(xì)胞核結(jié)構(gòu)正常，少數(shù)細(xì)胞核有輕度損傷，染色質(zhì)溶解、凝聚。肌漿網(wǎng)囊性擴(kuò)張。線粒體內(nèi)、外膜及嵴結(jié)構(gòu)模糊，不清晰

12、，閏盤結(jié)構(gòu)損害較重，可見局部囊性擴(kuò)張，部分閏盤崩解。
　　 5.模型組與空白對照組比較，心臟中VIP和AVP陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)均顯著增加(P＜0.01，P＜0.01)，天王補(bǔ)心丹組與模型組比較，VIP、AVP陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)均減少(P＜0.05，P＜0.01)；艾司唑侖組與模型組比較，VIP陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)減少但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，AVP陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著減少(P＜0.05)；模型組與空白對照組比較，SCN中VIP和AVP陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)

13、均顯著減少(P＜0.01，P＜0.01)，天王補(bǔ)心丹組與模型組比較，VIP和AVP陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)均顯著增加(P＜0.01，P＜0.01)，艾司唑侖組與模型組比較，VIP陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)減少(P＜0.05)，而AVP陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)增加(P＜0.01)。天王補(bǔ)心丹效果優(yōu)于艾司唑侖。
　　 6.模型組與空白對照組比較，心臟中VIPmRNA和AVPmRNA均顯著增加(P＜0.01，P＜0.01)，天王補(bǔ)心丹組與模型組比較，VIPmRNA、AVP

14、mRNA表達(dá)均顯著減少(P＜0.01，P＜0.01)，艾司唑侖組與模型組比較，VIPmRNA表達(dá)顯著減少(P＜0.01)，而AVPmRNA表達(dá)亦減少但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；模型組與空白對照組比較，SCN中VIPmRNA、AVPmRNA表達(dá)均顯著減少(P＜0.05、P＜0.01)，天王補(bǔ)心丹組與模型組比較，VIPmRNA、AVPmRNA表達(dá)均增加(P＜0.01，P＜0.01)；艾司唑侖組與模型組比較，VIPmRNA、AVPmRNA

15、表達(dá)均增加(P＜0.01，P＜0.01)。天王補(bǔ)心丹效果優(yōu)于艾司唑侖。
　　 結(jié)論：
　　 1.通過對《內(nèi)經(jīng)》睡眠理論進(jìn)行總結(jié)歸納，認(rèn)為睡眠是以神的活動(dòng)為綱紀(jì)，營衛(wèi)二氣的運(yùn)行出入為樞機(jī)，陰陽蹺脈的氣血流注為兆始，五臟生理功能(藏精化氣生神)為根柢的重要生命活動(dòng)。睡眠由心神主導(dǎo)和控制，老年失眠病位在心，心神失養(yǎng)或心神不寧是其主要病機(jī)，養(yǎng)心安神是其主要治法，天王補(bǔ)心丹是其代表方劑。
　　 2.本實(shí)驗(yàn)在D-半乳糖制作亞

16、急性衰老模型基礎(chǔ)上，采用咖啡因腹腔注射疊加多平臺(tái)水環(huán)境持續(xù)睡眠剝奪法制作老年失眠大鼠模型，在發(fā)病過程、證候表現(xiàn)方面與陰虛血少證有很強(qiáng)的相關(guān)性，基本符合臨床失眠特點(diǎn)，是一種新的證候模型制作方法。
　　 3.根據(jù)《內(nèi)經(jīng)》“心藏神”理論，本實(shí)驗(yàn)在D-半乳糖制作亞急性衰老模型基礎(chǔ)上，采用咖啡因腹腔注射疊加多平臺(tái)水環(huán)境持續(xù)睡眠剝奪法制作老年失眠大鼠模型，通過觀察心率、呼吸頻率、血壓、力竭性游泳時(shí)間等與心臟功能相關(guān)證候指標(biāo)、心肌超微結(jié)構(gòu)、心

17、臟中參與心衰發(fā)生發(fā)展的VIP、AVP及VIPmRNA、AVPmRNA表達(dá)等指標(biāo)，因此，本模型三種造模因素在一定程度上導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的心血管功能失常，影響到中醫(yī)理論中“心主血脈”功能，在一定程度上模擬了“心藏神”失司致失眠的病理機(jī)制，闡釋了“心藏神”主睡眠的科學(xué)內(nèi)涵。
　　 4.天王補(bǔ)心丹能使失眠大鼠模型呼吸頻率顯著降低，心率顯著減慢，動(dòng)脈血壓下降，力竭性游泳時(shí)間顯著增長，攝食量增加，體重增加，血紅蛋白總數(shù)和濃度均提高，耳溫降低；提