胃癌相關(guān)抗原模擬表位的篩選鑒定及人源性抗體噬菌體表面呈現(xiàn)文庫(kù)的構(gòu)建.pdf

1、該研究以MGb1-Ab為篩選配基,應(yīng)用噬菌體隨機(jī)肽庫(kù)篩選技術(shù),對(duì)胃癌相關(guān)抗原MGbl-Ag的模擬表位進(jìn)行篩選,并檢測(cè)篩選所得的噬菌體克隆與MGbl-Ab的結(jié)合活性,以及阻斷HGbl-Ab與胃癌細(xì)胞系KATO-Ⅲ結(jié)合的能力,進(jìn)而將所得的噬菌體免疫小鼠,檢測(cè)噬菌體呈現(xiàn)多肽的免疫原性,旨在獲得MGbl-Ag的多肽模擬表位,為胃癌表位疫苗的設(shè)計(jì)提供依據(jù).用陽(yáng)性噬菌體呈現(xiàn)多肽免疫Babl/c小鼠,研究了噬菌體呈現(xiàn)模擬表位的免疫原性.經(jīng)ELISA和

2、FACS檢測(cè),得到一株噬菌體呈現(xiàn)多肽,其誘導(dǎo)的免疫血清可與胃癌細(xì)胞KATO-Ⅲ發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng),為胃癌多肽疫苗的設(shè)計(jì)奠定了初步基礎(chǔ).該研究應(yīng)用噬菌體抗體庫(kù)技術(shù),擴(kuò)增人胃癌抗體IgGl的Fd段和κ輕鏈,并克隆入噬菌料載體pCOMB3,旨在構(gòu)建人源性胃癌抗體IgGl Fab段的噬菌體表面呈現(xiàn)文庫(kù),用于篩選胃癌人源性抗體Pab段.該研究采用異硫氰酸胍法,提取胃癌患者胃一級(jí)站引流淋巴結(jié)細(xì)胞的總RNA.采用RT-PCR法,將總RNA先反轉(zhuǎn)錄合成