正加速度（+Gz）重復(fù)暴露致大鼠腦損傷差異表達(dá)基因的篩選.pdf

1、現(xiàn)代高性能戰(zhàn)斗機在機動飛行中可產(chǎn)生很高的正加速度(+Gz),飛行員中+Gz致意識喪失(G-LOC)的發(fā)生率增多,對飛行安全構(gòu)成嚴(yán)重威脅.因此研究高G值重復(fù)暴露對腦的影響,揭示G-LOC的發(fā)生機理,已成為航空航天醫(yī)學(xué)研究的重要課題之一.以往的研究主要通過形態(tài)學(xué)改變及生理生化指標(biāo)變化等來探討其病理機制,而從基因水平探討+Gz所致G-LOC的機理研究很少.目前+Gz引起G-LOC發(fā)生的分子機制尚不清楚.因此,從分子病理學(xué)角度深入探討重復(fù)+Gz

2、暴露致腦損傷后基因表達(dá)的差異,對進(jìn)一步認(rèn)識其損傷的分子病理機理具有重要意義.該研究利用大鼠重復(fù)+10Gz暴露引發(fā)腦損傷的動物模型,觀察腦的病理學(xué)改變;應(yīng)用抑制性消減雜交技術(shù)篩選+Gz重復(fù)暴露大鼠腦的差異表達(dá)基因,旨在初步探討+Gz重復(fù)暴露致腦損傷的分子機制.1、采用SD大鼠重復(fù)+10Gz暴露的方法復(fù)制了+Gz致腦損傷動物模型.2、應(yīng)用抑制性消減雜交技術(shù)(SSH)篩選了+Gz重復(fù)暴露大鼠腦的差異表達(dá)基因.構(gòu)建高消減效率的+Gz重復(fù)暴露大鼠

3、腦cDNA消減文庫,擴增后cDNA文庫包含約400個白色克隆和100個藍(lán)色克隆,克隆飽滿清晰,隨機挑取75個白色克隆,制備質(zhì)粒后,以EcoR I酶切分析,表明大部分克隆入質(zhì)粒載體.3、經(jīng)SSH富集的cDNA文庫克隆入質(zhì)粒載體后共獲得70個陽性克隆,初步選取50個進(jìn)行PCR擴增,產(chǎn)物點膜經(jīng)差異篩選技術(shù)發(fā)現(xiàn)多個克隆顯示雜交信號的差異,篩選陽性克隆.4、進(jìn)一步驗證了通過SSH方法得到的差異表達(dá)基因片段在+10Gz重復(fù)暴露腦組織中的差異表達(dá)情況