IL-1β和MMP-13在兔骨關(guān)節(jié)炎模型軟骨和滑流中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：評價兔膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)半月板損傷制作骨關(guān)節(jié)炎模型方法的可行性，探討白介素-1beta(IL-1β)和金屬蛋白酶-13(MMP-13)在兔骨關(guān)節(jié)炎模型軟骨和滑液中的作用機(jī)制。
　　 方法
　　 1新西蘭大白兔40只，月齡4-6月，重量1.8-2.5kg。雌雄不限，由新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對照組，實(shí)驗(yàn)組30只，對照組10只。以右側(cè)后膝關(guān)節(jié)作為手術(shù)側(cè)。實(shí)驗(yàn)組在內(nèi)側(cè)半月板游離緣體部與后角交界處造成0.7×0

2、.3cm全層裂傷的無血運(yùn)區(qū)損傷，對照組僅打開關(guān)節(jié)腔；實(shí)驗(yàn)組于術(shù)后2、6、12周各處死10只。對照組術(shù)后12周處死。
　　 2觀察實(shí)驗(yàn)組2周、6周、12周及對照組12周動物的股骨髁關(guān)節(jié)軟骨的病理變化，并根據(jù)Pelletier JP方法行股骨髁關(guān)節(jié)軟骨病變評分；HE染色；用免疫組化方法檢測IL-1β和MMP-13的表達(dá)情況；用病理圖像分析系統(tǒng)，計(jì)算各組軟骨細(xì)胞中IL-1β和MMP-13表達(dá)的細(xì)胞分?jǐn)?shù)。分別抽取實(shí)驗(yàn)組2周、6周、12周

3、及對照組12周動物關(guān)節(jié)腔內(nèi)滑液后，用酶聯(lián)免疫吸附法測定關(guān)節(jié)液中IL-1β和MMP-13的含量。采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 結(jié)果
　　 1實(shí)驗(yàn)2周時大體觀察和病理觀察即可見軟骨退變；6周和12周時退變進(jìn)一步加重，對照組未見明顯軟骨退變，不同時間點(diǎn)關(guān)節(jié)軟骨評分有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 2 HE染色：對照組關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞排列規(guī)則，分層明顯、均勻，未見空泡細(xì)胞；實(shí)驗(yàn)組2周時軟骨細(xì)胞水腫；實(shí)驗(yàn)組6周時軟

4、骨細(xì)胞分層混亂，細(xì)胞腫脹；實(shí)驗(yàn)組12周時軟骨細(xì)胞稀疏，部分軟骨細(xì)胞簇集、水腫，且可見大量空泡細(xì)胞。
　　 3免疫組織化學(xué)：(1)IL-1β在兩組中均有表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組2周細(xì)胞分?jǐn)?shù)比對照組稍高，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；實(shí)驗(yàn)組6、12周細(xì)胞分?jǐn)?shù)比對照組細(xì)胞分?jǐn)?shù)明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)組6、12周細(xì)胞分?jǐn)?shù)比實(shí)驗(yàn)組2周細(xì)胞分?jǐn)?shù)明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)組12周細(xì)胞分?jǐn)?shù)比實(shí)驗(yàn)組6周細(xì)胞分?jǐn)?shù)明

5、顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(2)MMP-13在對照組關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中未見表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中可見MMP-13蛋白的表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組6周細(xì)胞分?jǐn)?shù)比實(shí)驗(yàn)組2周細(xì)胞分?jǐn)?shù)明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)組12周細(xì)胞分?jǐn)?shù)比實(shí)驗(yàn)組6周細(xì)胞分?jǐn)?shù)明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)組12周細(xì)胞分?jǐn)?shù)比實(shí)驗(yàn)組2周細(xì)胞分?jǐn)?shù)高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 4.ELISA：實(shí)驗(yàn)組第2周關(guān)節(jié)滑液中