漢防己甲素對大鼠急性脊髓損傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡及相關(guān)蛋白Bcl-2和Bax表達(dá)的影響.pdf

1、目的：動態(tài)觀察大鼠急性脊髓損傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡和相關(guān)蛋白分子表達(dá)的情況以及漢防己甲素(Tetrandrine，Tet)對其的影響，初步探討其作用機制，并為臨床上治療急性脊髓損傷提供實驗依據(jù)。 方法：選用95只成年Sprague-Dawley(SD)大鼠，雌雄不限，體重250±50g。隨機分為四組，即空白對照組5只，損傷組(SCI組)30只，治療A組(Tet組)30只、治療B組(甲基強的松龍組)30只。除空白對照組以外的所有動物均在

2、胸10椎板切除后進(jìn)行改良Allen’s重物打擊法制作脊髓損傷模型。在損傷局部，損傷組滴入生理鹽水，治療A組滴入漢防己甲素，治療B組滴入甲基強的松龍，且治療A組和治療B組動物術(shù)后三天每天腹腔分別注射Tet和甲基強的松龍?？瞻讓φ战M動物于術(shù)后2ld處死，余三組動物分別于術(shù)后8h，1d，3d，7d，14d，21d處死，取損傷段脊髓約5mm，石蠟切片HE染色，觀察脊髓組織的形態(tài)、結(jié)構(gòu)變化。免疫組織化學(xué)染色，檢測細(xì)胞凋亡調(diào)控因子Bcl-2、Bax

3、。運用流式細(xì)胞儀對各標(biāo)本進(jìn)行凋亡細(xì)胞的半定量分析。 結(jié)果： 1.組織學(xué)檢測損傷組表現(xiàn)為大量的出血壞死灶，空泡變性，神經(jīng)元變性壞死和炎性細(xì)胞浸潤，治療A組明顯優(yōu)于損傷組，治療B組優(yōu)于治療A組，術(shù)后8h-21d動態(tài)觀擦，3d-7d損傷表現(xiàn)最為嚴(yán)重，達(dá)到損傷高峰期。 2.凋亡因子檢測損傷組BaX表達(dá)較多，Bc1-2表達(dá)較少；治療A組中Bax表達(dá)相對較少，Bc1-2表達(dá)量增加；治療B組中Bax表達(dá)很少， Bc1-2表達(dá)量

4、明顯增多，除空白組外其他各組的動態(tài)觀察中，在損傷后7d時Bc1-2和Bax均達(dá)到表達(dá)高峰。各時點比較，Bc1-2表達(dá)量治療B組最多，治療A組次之，損傷組最少；Bax表達(dá)量損傷組最多，治療A組次之，治療B組最少。 3.凋亡細(xì)胞半定量分析各組均在損傷后7d達(dá)到凋亡細(xì)胞數(shù)峰值，8h-7d逐漸增多，7d-21d有輕度減少趨勢。同一時點上各組間比較治療A組明顯少于損傷組，治療B組少于治療A組。各組間存在明顯差異。 結(jié)論：

5、 (1)本實驗結(jié)果顯示急性脊髓損傷后伴隨有嚴(yán)重的繼發(fā)性傷害，主要表現(xiàn)為神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，且隨時間變化，傷后7d達(dá)到凋亡高峰，且凋亡調(diào)控因子Bc1-2和Bax均有明確的表達(dá)。 (2)漢防己甲素的運用有效干擾了凋亡調(diào)控基因的表達(dá)量，促進(jìn)了抗凋亡基因bc1-2的表達(dá)，同時抑制了促凋亡基因bar的表達(dá)，從而有效的抑制了神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，保護(hù)了脊髓功能。但是具體的作用機理還不甚明確，而且療效與目前國際臨床上療效最為肯定的藥物甲基強的松龍相比還