大腸桿菌高密度發(fā)酵制備重組人金屬硫蛋白-Ⅲ.pdf

1、本文首次對大腸桿菌生產(chǎn)重組人金屬硫蛋白-Ⅲ(rhMT-Ⅲ)的高密度發(fā)酵工藝進行了研究。從發(fā)酵培養(yǎng)基、控制溶氧量、補料方式、誘導方法等方面進行了優(yōu)化。最終在5 L發(fā)酵罐中，大腸桿菌濕菌重最高可達140 g/L，目標融合蛋白約占全菌總蛋白的23％以上。對菌體進行分離純化，rhMT-Ⅲ得率約為每升菌液90毫克蛋白，純度80％以上。 論文包括四個部分： 1．文獻綜述首先對金屬硫蛋白及金屬硫蛋白-Ⅲ的理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)特點、生物學功能

2、等方面的研究進行綜述；并概述了大腸桿菌高密度發(fā)酵的基本情況。最后簡述了金屬硫蛋白的制備方法及本論文的研究目的和意義。 2．重組大腸桿菌搖瓶發(fā)酵工藝的研究用單因素實驗確定培養(yǎng)基主要成分，并對誘導劑濃度、表達時間及誘導方式等對菌體生長及目的蛋白表達的影響進行了研究。結(jié)果表明添加IPTG及乳糖復合誘導的方式是可行的。 3．重組大腸桿菌在5L發(fā)酵罐高密度發(fā)酵工藝的研究以搖瓶發(fā)酵的結(jié)果為基礎，在5 L發(fā)酵罐中，采用平衡DO-sta

3、r法，通過攪拌、通入富氧、控制補料流加、優(yōu)化誘導時機等方法，實現(xiàn)了大腸桿菌的高密度發(fā)酵。碳源為甘油時，在菌體生長的對數(shù)中后期加入IPTG誘導，濕菌重最高可達115 g/L，融合蛋白表達約占全菌蛋白的23.88％。碳源為葡萄糖時，在菌體生長對數(shù)中期加入IPTG及乳糖復合誘導的方式，濕菌重最高可達140g/L，融合蛋白表達約占全菌蛋白的23.01％。 4．重組人MT-Ⅲ的分離純化及檢測高密度發(fā)酵所收獲的菌體，經(jīng)超聲破碎、親和層析、凝