兔膝關(guān)節(jié)炎模型超激光照射后關(guān)節(jié)軟骨的病理觀察.pdf

1、目的：骨性關(guān)節(jié)炎(OA)是一種退行性骨關(guān)節(jié)病變，最易發(fā)生在膝關(guān)節(jié)。隨著年齡的增加骨性關(guān)節(jié)炎患病率直線上升。骨性關(guān)節(jié)炎造成的疼痛和功能障礙嚴(yán)重影響著患者的生活和工作，給家庭和社會帶來巨大的壓力。目前對骨性關(guān)節(jié)炎的治療主要是緩解疼痛，改善功能，降低致殘率。防治方法包括：降低體重、功能鍛煉，使用鎮(zhèn)痛藥物，關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射糖皮質(zhì)激素和玻璃酸鈉，口服硫酸葡萄胺，關(guān)節(jié)鏡清理沖洗，關(guān)節(jié)置換等?？诜晴摅w消炎鎮(zhèn)痛藥仍是比較普遍的采取的治療措施，對緩解疼痛是

2、有益的，但并不能抑制關(guān)節(jié)軟骨的病理變化的進程。而臨床上常用的關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射糖皮質(zhì)激素療法，雖然可短時間改善癥狀，但長期注射可造成關(guān)節(jié)軟骨的灶性溶解、壞死等，進一步加速了關(guān)節(jié)軟骨的退變。目前除了關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射玻璃酸鈉和口服硫酸葡萄胺有益于關(guān)節(jié)軟骨的改善之外，還沒有比較理想的保守治療方法。光照射治療用于關(guān)節(jié)炎的治療已有數(shù)十年的歷史，我們引進日本東京醫(yī)研株式會社生產(chǎn)的超激光疼痛治療儀，以直線偏光近紅外線對關(guān)節(jié)和軟組織進行照射治療，取得了明顯的療效

3、，但其對關(guān)節(jié)軟骨和關(guān)節(jié)滑膜的病理改變還沒有詳細的報道。本實驗的目的在于研究超激光疼痛治療儀照射治療關(guān)節(jié)炎對關(guān)節(jié)滑膜和軟骨的病理影響，進而來客觀的評價超激光疼痛治療儀對骨性關(guān)節(jié)炎的臨床治療作用，以期尋求一種安全、無副作用，療效確切的治療骨性關(guān)節(jié)炎的新方法。 方法：選擇成年日本大耳白兔54只，雌雄各半，體重2.5±0.5kg，兔齡3.0±0.5月，隨機分為A、B、C、D、E、F、G、H、I共9組，每組6只。其中A、B、C、D、E、F

4、、G組均進行膝關(guān)節(jié)模型的制作。模型制作方法：隨機選擇一側(cè)膝關(guān)節(jié)，采用烏拉坦進行全身麻醉，并輔助0.5％的利多卡浸潤阻滯麻醉，采用縱行切口依次切開膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)的皮膚、膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)副韌帶和關(guān)節(jié)囊，用纖維剪刀伸入關(guān)節(jié)腔內(nèi)切斷膝關(guān)節(jié)內(nèi)外交叉韌帶，并切除膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)半月板，然后進行膝關(guān)節(jié)的抽屜試驗加以驗證前后交叉韌帶是否完全離斷。之后逐層縫合切斷的膝關(guān)節(jié)囊、肌肉和皮膚。手術(shù)結(jié)束，待兔完全清醒后送回動物飼養(yǎng)室，每日每只肌注青霉素40萬單位，連用5天。A、

5、B、C、D組術(shù)后1周開始超激光照射治療，F(xiàn)、G、H、I組術(shù)后一周開始假照射治療。A組每日照射治療5分鐘，B組每日照射10分鐘，連續(xù)照射3周，用于觀察不同照射時間對關(guān)節(jié)炎的預(yù)防作用；C組照射5分鐘，每天一次，D組照射10分鐘，每天一次，兩組連續(xù)照射7周用于觀察不同的照射時間在關(guān)節(jié)炎形成的過程中對關(guān)節(jié)的防治作用；E組在模型制作手術(shù)完成后4周，即膝關(guān)節(jié)炎模型形成后開始照射，每天10分鐘，連續(xù)照射3周，用于觀察在關(guān)節(jié)炎模型形成后超激光照射對關(guān)節(jié)

6、的治療作用。F組在模型制作手術(shù)后1周進行假照射3周，作為A、B兩組的模型對照組；G組在模型制作手術(shù)后1周進行假照射治療7周，作為C、D、E三組的模型對照組。H、I兩組為空白對照組，其中H組在正常飼養(yǎng)1周后進行假照射治療3周，作為A、B兩組的空白對照組；I組在正常飼養(yǎng)1周后進行假照射治療7周，作為C、D、E三組的空白對照組。 照射方法：采用B型探頭照射，輸出功率為2200mM，能量采用80％。由助手將兔仰臥位固定于治療床上，治療者

7、采用手持法將探頭放在手術(shù)關(guān)節(jié)的髕前韌帶的內(nèi)側(cè)，即相當(dāng)于股骨端與脛骨端相對處，將探頭置于其上，并稍斜向內(nèi)，使照射探頭發(fā)射的光束照射到整個關(guān)節(jié)腔內(nèi)。模型對照組和空白對照組進行假照射治療。 標(biāo)本處理：療程結(jié)束后采用靜脈空氣注射法處死所有實驗用兔，切開關(guān)節(jié)腔，切取脛骨平臺上的關(guān)節(jié)軟骨和膝關(guān)節(jié)前正中部分的滑膜組織，并將軟骨組織一部分10％福爾馬林液固定，留做普通光鏡的病理觀察。選取脛骨平臺上的外1/3處切取2×2mm大小的軟骨組織放入3％

8、的戊二醛溶液中并在4℃冰箱中至少固定4小時以上，留做透射電鏡的觀察。 光鏡觀察：對切取的關(guān)節(jié)軟骨和滑膜，HE染色后，每張切片選擇6個不同部位進行光鏡(×200)病理觀察，并參照C.Colombo的關(guān)節(jié)軟骨病理積分標(biāo)準(zhǔn)進行病理評分。 電鏡觀察：每組中分別取兩模型的關(guān)節(jié)軟骨進行透射電鏡的病理觀察。 統(tǒng)計處理：對所有數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析。所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件，P＜0.05認(rèn)為差異顯著，

9、P＜0.01認(rèn)為差異非常顯著。 結(jié)果：術(shù)后4周時模型組中照射治療組和未照射治療組的關(guān)節(jié)軟骨仍顯光澤，略發(fā)黃，軟骨觸之較硬關(guān)節(jié)液量增多，關(guān)節(jié)液呈黃色，無明顯的關(guān)節(jié)軟骨表面的裂紋、糜爛和潰瘍的形成，兩組表現(xiàn)基本一致。術(shù)后8周模型組中關(guān)節(jié)的病理改變進一步加重，關(guān)節(jié)軟骨失去原有的光澤，呈灰黃色，未治療組較治療組明顯為重，軟骨表面變得粗糙，并有裂紋、糜爛和潰瘍形成，軟骨層變薄，部分露出骨面。 光鏡觀察：術(shù)后4周A、B兩組關(guān)節(jié)軟骨表

10、面脆裂，基質(zhì)未見到明顯的潰瘍面，軟骨細胞稍減少，排列尚整齊，細胞成簇存在。F組的關(guān)節(jié)軟骨表面脆裂明顯，基質(zhì)可見到部分潰瘍，軟骨細胞減少，排列不規(guī)則，細胞成簇存在。A組和B組病理變化總積分明顯低于F組(p＜0.05)，但A、B兩組比較無差別(p＞0.05)。術(shù)后8周：C組、D組兩組軟骨表面脆裂明顯，并出現(xiàn)糜爛和潰瘍，偶見邊緣骨贅形成，軟骨細胞數(shù)目減少，排列紊亂，細胞成簇增加。G組軟骨表面出現(xiàn)明顯的裂紋，中等表層缺損，可見到小骨贅和潰瘍面的

11、形成及輕度軟骨下骨裸露，軟骨細胞中度減少，排列無規(guī)則，細胞成簇明顯。C、E組關(guān)節(jié)軟骨病理積分均明顯低于G組(p＜0.05)，D組關(guān)節(jié)軟骨病理積分明顯低于G組(p＜0.01)，且D組關(guān)節(jié)軟骨病理積分低于C組，但無統(tǒng)計學(xué)差異。C組和E組的軟骨細胞成簇積分和細胞丟失積分低于G組(p＜0.05)，D組軟骨細胞成簇積分和細胞丟失積分非常顯著低于G組(p＜0.01)。 電鏡觀察：I組(正常關(guān)節(jié)軟骨)：軟骨細胞肥胖，細胞器豐富，可見少量糖元及

12、脂滴。表層下方未見纖維母細胞樣細胞，間質(zhì)有大量膠原纖維交錯排列(見圖11)；A組表層下方未見纖維樣母細胞，間質(zhì)大量膠原纖維散亂排列，軟骨細胞較肥胖，細胞器豐富，細胞周圍?？梢娸^細碎的膠原纖維呈環(huán)狀排列(見圖13)；B組表層下方未見纖維樣母細胞，間質(zhì)大量膠原纖維散亂排列，軟骨細胞增生明顯，細胞器豐富(見圖12)；C組軟骨細胞增生活躍，細胞器豐富，組織內(nèi)可見較多的纖維母細胞樣細胞，間質(zhì)有大量膠原纖維編織狀排列(見圖15)；D組軟骨細胞較肥厚

13、，糖元較豐富，少數(shù)細胞內(nèi)可見脂滴。F組軟骨細胞較多，體積較小，細胞器豐富(見圖16)；G組軟骨細胞稀疏，少數(shù)細胞內(nèi)可見脂滴，部分軟骨細胞發(fā)生變性(見圖17)。電鏡觀察結(jié)果表明，超激光照射治療可延緩軟骨細胞的破壞，促進軟骨細胞和纖維母細胞的增生，對骨性關(guān)節(jié)炎具有積極的預(yù)防和治療作用。 結(jié)論：超激光照射治療骨性關(guān)節(jié)炎可明顯的促進關(guān)節(jié)周圍軟組織的修復(fù)，減緩關(guān)節(jié)軟骨的破壞，改善關(guān)節(jié)功能的作用。對骨性關(guān)節(jié)炎具有一定的預(yù)防和治療作用，且適當(dāng)