兩親性肽自組裝凝膠體外誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞的研究.pdf

1、目的： 設(shè)計(jì)含活性配體的兩親性肽，在含神經(jīng)干細(xì)胞（neural stem cells NSCs）的DMEM/F12溶液觸發(fā)下自組裝成凝膠，研究其對(duì)NSCs生長(zhǎng)及分化的影響。 方法： 取小鼠乳鼠大腦皮質(zhì)，機(jī)械分離，無(wú)血清培養(yǎng)，獲得具有自我增殖能力的NSCs，免疫組織化學(xué)鑒定。實(shí)驗(yàn)組（EG）：分a1、a2、A1、A2亞組及b1、b2、B1、B2亞組，a1、a2、A1、A2亞組將1％質(zhì)量分?jǐn)?shù)（wt）肽加入含細(xì)胞的等體積

2、的DMEM/F12液中，構(gòu)建三維肽凝膠培養(yǎng)體系；b1、b2、B1、B2亞組將NSCs接種子二維肽凝膠表面；對(duì)照組（CG）：分c1、c2及C1、C2亞組，細(xì)胞接種于多聚賴氨酸表面，進(jìn)行培養(yǎng)，免疫細(xì)胞化學(xué)染色，激光共聚焦顯微鏡（Laser Confocal Microscopy，LCM）及倒置相差顯微鏡（Inverted phase contrast microscope，IPCM）觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)及分化情況，CCK-8酶標(biāo)法檢測(cè)并繪制細(xì)胞生

3、長(zhǎng)曲線，透射電子顯微鏡（Transmission Electron Microscope，TEM）檢測(cè)肽凝膠及細(xì)胞在凝膠中的超微結(jié)構(gòu)。 結(jié)果： 免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定：培養(yǎng)的細(xì)胞為NSCs，Nestin標(biāo)記陽(yáng)性。IPCM觀察：EG中，NSCs在肽凝膠表面及內(nèi)部，培養(yǎng)2天形成細(xì)胞球，7天后形成神經(jīng)元樣形態(tài)；CG中，c1亞組僅形成細(xì)胞球，c2亞組細(xì)胞可形成神經(jīng)元形態(tài)。LCM觀察，EG中，NSCs分化為神經(jīng)元與星形膠質(zhì)細(xì)胞，NF

4、標(biāo)記陽(yáng)性，GFAP標(biāo)記陽(yáng)性：CG：c1亞組可見(jiàn)NSCs球，Nestin標(biāo)記陽(yáng)性，c2亞組為神經(jīng)元與星形膠質(zhì)細(xì)胞，NF標(biāo)記陽(yáng)性，GFAP標(biāo)記陽(yáng)性。CCK-8酶標(biāo)法顯示：培養(yǎng)的第3-7天三維肽凝膠培養(yǎng)體系細(xì)胞增殖活力明顯高于二維培養(yǎng)體系，且有顯著性差異（p<0.05），A1、A2亞組間無(wú)顯著性差異（p>0.05）；培養(yǎng)的第3-7天二維肽凝膠培養(yǎng)組（B1、B2亞組）及對(duì)照組C2亞組細(xì)胞增殖略高于C1亞組，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）；B1、B