綠茶多酚納米碳酸鈣固定化酶定向轉(zhuǎn)化及其產(chǎn)物的生物學活性研究.pdf

1、綠茶多酚是茶的主要成分，約占總干物質(zhì)的18％～36％，其主要組成成分是兒茶素類。它清除超氧化物自由基和羥自由基的功效與茶保健和治療某些疾病的作用機制是密切有關(guān)的。其氧化產(chǎn)物茶黃素是多酚物質(zhì)氧化形成的一類能溶于乙酸乙酯的、具有苯駢卓酚酮的化合物的總稱，是茶色素中生物學活性較強的物質(zhì)，其保健功效、提取和分離技術(shù)等受到中外學者的高度重視。在茶黃素的組成、結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、形成機理、分析技術(shù)及方法、與紅茶品質(zhì)的關(guān)系及茶黃素形成的影響因子和調(diào)控等方面，

2、進行了廣泛深入的研究和探討，取得了一系列可喜的進展。實驗證明，茶黃素具有高抗癌、抗心腦血管疾病、抗菌、抗病毒等多種活性，其效果明顯優(yōu)于茶多酚。茶黃素被廣泛認定為茶葉中活性利用潛力最大的物質(zhì)之一，而紅茶中其含量低、難于實現(xiàn)工廠化生產(chǎn)是當前存在的主要難題。 體外酶促氧化制取茶黃素是利用多酚氧化酶的氧化特性定向生產(chǎn)茶黃素。本實驗利用納米碳酸鈣作為固定化材料，對茶多酚氧化酶進行固定化，研究了溫度、pH值、反應時間、底物濃度對固定化酶活性

3、的影響，確定了納米碳酸鈣多酚氧化酶體外氧化茶多酚的最佳工藝參數(shù)為：37℃、pH5.0、氧化10min,納米碳酸鈣固定化多酚氧化酶的高溫耐受性及穩(wěn)定性均較游離酶強，對pH的穩(wěn)定性也顯著增加，并證實納米碳酸鈣固定化多酚氧化酶的活性有顯著提高。 本實驗以紅茶中提取的茶黃素粗提物和氧化前的茶多酚為對照，利用HPLC技術(shù)分析了綠茶多酚納米碳酸鈣固定化多酚氧化酶氧化產(chǎn)物的茶黃素組成。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，納米碳酸鈣固定化酶體外氧化產(chǎn)物中茶黃素組成以TF

4、2A為主，而茶黃素粗提物中四種茶黃素單體均占一定的比例，說明納米碳酸鈣固定化多酚氧化酶對茶多酚的氧化有一定的定向性。 以綠茶多酚、紅茶中提取的茶黃素粗提物為對照，利用紫外掃描技術(shù)、UV-Vis法及CuSO4-Vc-H2O2-酵母體系和Fe2+-H2O2-酵母體系研究了綠茶多酚納米固定化多酚氧化酶體外氧化產(chǎn)物的發(fā)光強度、顏色穩(wěn)定性及對自由基的清除能力。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在不同pH值條件下，茶黃素粗提物和綠茶多酚納米固定化酶體外氧化產(chǎn)物的紫

5、外吸收光譜的變化趨勢相似，堿性增加，吸光度增加；綠茶多酚、茶黃素粗提物及綠茶多酚納米固定化酶體外氧化產(chǎn)物對DPPH·自由基均有明顯清除作用，綠茶多酚納米固定化酶體外氧化產(chǎn)物清除效果較綠茶多酚和茶黃素粗提物強；固定化酶氧化產(chǎn)物抗氧化活性較茶黃素粗提物和茶多酚強。綠茶多酚納米固定化酶體外氧化產(chǎn)物優(yōu)于茶黃素粗提物。因此，綠茶多酚納米碳酸鈣固定化酶體外氧化產(chǎn)物中茶黃素保持了紅茶中茶黃素所具有的良好生物學活性。 茶黃素對前列腺癌具有預防和

6、治療作用。本研究利用前列腺癌細胞培養(yǎng)體系研究了綠茶多酚納米固定化酶體外氧化產(chǎn)物對前列腺癌細胞生長的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，綠茶多酚納米碳酸鈣固定化酶體外氧化產(chǎn)物對前列腺癌細胞具有較強的抑制作用且表現(xiàn)劑量依賴性抑制作用，在相同條件下，其對前列腺癌細胞生長的抑制作用較紅茶粗提物強。 作為人體必需元素，鋅離子的缺乏與積累與癌癥的發(fā)生有密切關(guān)系。本實驗在前列腺癌細胞培養(yǎng)體系下，研究了鋅離子對前列腺癌細胞生長的影響，以及鋅與氧化產(chǎn)物共存體系中，鋅