尿酸與心血管疾病的關(guān)系及相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、隨著人類生活水平提高和膳食結(jié)構(gòu)改變，高尿酸血癥的患病率在世界范圍內(nèi)呈明顯上升趨勢。大量臨床流行病學(xué)研究提示，人血清尿酸水平升高與心腦血管疾病或其危險因素密切相關(guān)，但血清尿酸水平升高/高尿酸血癥是否為心腦血管疾病的獨立危險因素還不十分清楚；血管內(nèi)皮細(xì)胞功能損傷是發(fā)生心腦血管疾病或其危險因素(高血壓、代謝綜合征等)的重要早期環(huán)節(jié)，尿酸對血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響及機(jī)制亦多有爭論。
　　 目的：通過流行病學(xué)調(diào)查研究人群中血清尿酸水平/高尿

2、酸血癥與心腦血管疾病之間的關(guān)系，并通過體外實驗初步探索尿酸對血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響及其機(jī)制。內(nèi)容分為4個部分，第1部分是流行病學(xué)調(diào)查，第2～4部分是體外細(xì)胞實驗:1)血清尿酸水平/高尿酸血癥與心腦血管損傷在北京地區(qū)部分體檢人群中的相關(guān)性研究:2)尿酸對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖、活力和凋亡的影響；3)尿酸對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)皮型一氧化氮合酶基因表達(dá)和功能的影響；4)尿酸對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生活性氧簇的影響。
　　 方法：
　　

3、 1)2005年9～12月我們對北京地區(qū)部分體檢人群進(jìn)行了一次橫斷面調(diào)查，通過問卷、查體和血生化檢查分別收集研究對象的人口學(xué)資料、生活習(xí)慣、既往病史、查體及血生化指標(biāo)，以血清尿酸水平/高尿酸血癥為預(yù)測變量，心腦血管損傷為結(jié)局變量，其他與血清尿酸水平/高尿酸血癥和心腦血管損傷均有較密切聯(lián)系的其他指標(biāo)為混淆變量，通過建立多元Logistic回歸數(shù)學(xué)模型對混淆變量進(jìn)行調(diào)整，分析血清尿酸水平升高/高尿酸血癥與心腦血管疾病是否獨立相關(guān)；
　

4、　 2)通過AnnexinV-FITC｜PI雙染法、CFDA-SE熒光探針和細(xì)胞ATP螢光素酶測定法初步了解尿酸對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、增殖和活力的影響；3)通過RT-PCR、Real-TimePCR和WesternBlotting測定內(nèi)皮型一氧化氮合酶基因在mRNA水平和蛋白質(zhì)水平的相對表達(dá)量，通過Griess反應(yīng)測定臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞及其培養(yǎng)液中NO'代謝產(chǎn)物的量，間接反映內(nèi)皮型一氧化氮合酶合成NO'的功能；
　　 4)通過H

5、2DCF-DA熒光探針測定人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞生成活性氧簇的量，并通過比較尿酸對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞生成NO'(血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的保護(hù)因素)和活性氧簇(血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的損傷因素)的作用，分析尿酸在體外環(huán)境中對血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1)在流行病學(xué)研究中，簡單的雙變量分析發(fā)現(xiàn)女性人群中高尿酸血癥者比血清尿酸正常者出現(xiàn)心腦血管損傷的比例顯著升高，即使血清尿酸水平在正常范圍內(nèi)(按四分位計算)，心腦血管損傷的比例

6、也隨血清尿酸水平上升而顯著升高，而男性人群中高尿酸血癥者雖比血清尿酸正常者出現(xiàn)心腦血管損傷的比例有所升高，但統(tǒng)計學(xué)上并無顯著性差異，當(dāng)血清尿酸水平在正常范圍內(nèi)(按四分位計算)時，心腦血管損傷的比例也未隨血清尿酸水平上升而出現(xiàn)顯著變化；通過多元Logistic回歸數(shù)學(xué)模型對混淆變量進(jìn)行調(diào)整后發(fā)現(xiàn)，女性人群中血清尿酸第2個和第4個四分位數(shù)(分別為3.6～4.1mg/dl和≥4.9mg/dl)比第1個四分位數(shù)(≤3.5mg/dl)出現(xiàn)心血管損

7、傷(寬松定義)的比例顯著升高(p<0.01)，高尿酸血癥者出現(xiàn)較重心血管損傷的風(fēng)險比血清尿酸水平正常者高，但未達(dá)到統(tǒng)計學(xué)差異(p=0.07)，在男性人群中，多元Logistic回歸數(shù)學(xué)模型對混淆變量調(diào)整前后的結(jié)果沒有實質(zhì)性差別；
　　 2)體外細(xì)胞實驗發(fā)現(xiàn)，尿酸(0，5，10，20，30mg/dl)作用24h、48h和72h后，各組人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生凋亡的比例沒有顯著差別，尿酸作用24h和48h對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖指數(shù)和總

8、活力沒有顯著影響，而尿酸作用72h后人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖指數(shù)和總活力隨尿酸濃度升高呈顯著下降趨勢；
　　 3)各組人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)皮型一氧化氮合酶在mRNA水平和蛋白水平的相對表達(dá)量以及細(xì)胞培養(yǎng)液中NO'代謝產(chǎn)物的量隨尿酸濃度升高呈顯著上升趨勢；4)各組人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中活性氧簇的量隨尿酸濃度升高呈顯著下降趨勢。
　　 結(jié)論：
　　 1)流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，女性高尿酸血癥/血清尿酸水平升高可能與心血管疾病的風(fēng)險

9、升高獨立相關(guān)，但未發(fā)現(xiàn)男性血清尿酸水平升高/高尿酸血癥與心腦血管疾病的風(fēng)險升高相關(guān)，這可能是由于年輕男性中血清尿酸水平較高掩蓋了男性人群中血清尿酸水平升高/高尿酸血癥與心腦血管疾病之間的聯(lián)系；
　　 2)體外細(xì)胞實驗發(fā)現(xiàn)，尿酸對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡和活力沒有顯著影響，但尿酸作用72h對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖有抑制作用，其意義未明；
　　 3)尿酸作用使人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中活性耦合狀態(tài)的內(nèi)皮型一氧化氮合酶增加，生成釋放NO'