慢性低度炎癥肥胖小鼠造模與模擬節(jié)食的抗炎減肥機理研究.pdf

1、目的：
　　隨著人類營養(yǎng)水平的提高和生活方式的改變，世界上超重及肥胖人口的比例越來越高，由肥胖帶來的健康和社會問題也越來越嚴(yán)重。因此，如何減肥并預(yù)防肥胖性疾病已成為當(dāng)前公共衛(wèi)生領(lǐng)域最受關(guān)注的焦點和熱點。本研究擬通過比較高脂+高劑量脂多糖與高脂+低劑量脂多糖誘導(dǎo)的小鼠非炎癥及炎癥肥胖模型，證實我們提出的“慢性低度炎癥源于痕量細(xì)菌內(nèi)毒素”假說。在此基礎(chǔ)上，以小鼠炎癥肥胖模型評價潛在減肥單體藥及復(fù)方藥的療效，并解析其分子藥理學(xué)機制，以便

2、探索節(jié)食模擬（無熱量限制）抗炎減肥的可行性，并為今后制定更有效的減肥方案提供依據(jù)。
　　方法：
　　通過構(gòu)建高脂飼料誘導(dǎo)的單純營養(yǎng)型肥胖小鼠模型、高脂+高/低劑量脂多糖誘導(dǎo)的模擬感染型肥胖小鼠模型和高脂+氯丙嗪誘導(dǎo)的鎮(zhèn)靜降耗型肥胖小鼠模型，采用形態(tài)學(xué)指標(biāo)（體重曲線、體脂比和肝指數(shù)）、血清學(xué)指標(biāo)（甘油三酯、膽固醇、轉(zhuǎn)氨酶、胰島素、瘦素水平）和基因組學(xué)指標(biāo)（促炎癥細(xì)胞因子表達基因芯片和蛋白質(zhì)芯片），以經(jīng)典減肥藥2，4-二硝基苯酚

3、（因副作用嚴(yán)重早已被淘汰）作為陽性對照藥，分別對臨床抗瘧藥青蒿琥酯、心絞痛緩解藥硝酸甘油和民間試用但尚未批準(zhǔn)上市的減肥中藥復(fù)方蘆薈蟲草丹的減肥效果進行比較研究，根據(jù)乳酸、一氧化氮、3-硝基酪氨酸、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子、促炎癥細(xì)胞因子表達譜、脂肪肝相關(guān)基因表達微陣列和腸道菌群分類表型顯示等，探討肥胖的可能原因及減肥的可能途徑。
　　結(jié)果：
　　以高脂飼料為基礎(chǔ)的脂多糖或氯丙嗪造模均可在數(shù)周內(nèi)高效誘導(dǎo)小鼠肥胖（肥胖度增加20％以上），其

4、中高脂+脂多糖模型的體脂比（P＜0.01)、血清膽固醇含量（P＜0.05）和血清胰島素水平（P＜0.001）均顯著提高，高脂+氯丙嗪模型的谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性顯著升高（P＜0.05)。利用高脂+低劑量脂多糖模型的療效評價結(jié)果表明，2，4-二硝基苯酚(16mg/kg)、青蒿琥酯(0.25mg/kg)和硝酸甘油(6mg/kg)均能使體脂比顯著降低（P＜0.05)，血清胰島素恢復(fù)到對照水平（P＜0.01），表明減肥效果顯著。
　　高脂+低劑量

5、脂多糖模型組的炎癥活化標(biāo)志NF-κB mRNA顯著上調(diào)（P＜0.001），而3種單藥均使NF-κB mRNA大幅下調(diào)至對照水平。同時，模型組促炎癥細(xì)胞因子mRNA上調(diào)，而處理組促炎癥細(xì)胞因子mRNA下調(diào)。因此，消炎可能是2，4-二硝基苯酚、青蒿琥酯和硝酸甘油的重要減肥機理。此外，模型組中HO-1 mRNA和VEGF mRNA下調(diào)，處理組中青蒿素則使其上調(diào)，提示有促血管再生作用。
　　為了探討高脂+脂多糖在誘發(fā)非酒精性脂肪肝病中的可

6、能作用，我們利用微陣列分析評價了高脂+高劑量(1.2mg/kg)脂多糖與低劑量(0.25mg/kg)脂多糖誘導(dǎo)肥胖小鼠血清中40種促炎癥細(xì)胞因子及肝臟中84種脂肪肝相關(guān)基因表達水平。結(jié)果表明，高脂+高劑量脂多糖僅輕微上調(diào)促炎癥細(xì)胞因子及部分活化脂肪肝相關(guān)基因，而一氧化氮及3-硝基酪氨酸水平先升后降，推測高劑量脂多糖可能誘生抗脂多糖抗體并清除脂多糖，從而減輕脂多糖誘導(dǎo)脂肪在肝臟的蓄積。相反，高脂+低劑量脂多糖可大幅上調(diào)促炎癥細(xì)胞因子并大量

7、活化脂肪肝相關(guān)基因，但經(jīng)給藥治療后表達水平全部恢復(fù)正常。
　　高脂誘導(dǎo)肥胖小鼠模型的體脂比和肝指數(shù)均比對照高，差異達到極顯著水平（P＜0.001)，血清膽固醇含量的差異也達到顯著水平（P＜0.05)。用蘆薈蟲草丹灌胃后，處理組的體脂比和肝指數(shù)均比模型組低，其中造模前給藥的下降程度達到極顯著水平（P＜0.01)，造模后給藥的下降程度達到顯著水平(P＜0.05)，表明該藥不僅能預(yù)防肥胖，而且能治療肥胖。通過腸道菌群分類培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，蘆薈蟲

8、草丹能加速體內(nèi)大腸桿菌生長并促進帶菌排便，也能促進體外培養(yǎng)的大腸桿菌增殖，表明該藥可能通過排菌清腸達到減肥目的。
　　結(jié)論：
　　本研究首次發(fā)現(xiàn)低劑量脂多糖可誘發(fā)全身慢性低度炎癥，并證實抗瘧藥青蒿琥酯和緩解心絞痛藥硝酸甘油能模擬2，4-二硝基苯酚發(fā)揮其潛在減肥作用，還闡明了3種單體藥消炎、抗缺氧、抗DNA損傷和抗血管新生的減肥機理，同時也驗證了1種復(fù)方藥的排菌清腸減肥機理。由于非熱量限制（不節(jié)食）減肥方式更易被人接受，因此這