霉茶緩釋片制備及其藥效與代謝動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、霉茶系葡萄科蛇葡萄屬植物大葉蛇葡萄(A.megalophyllaDielset.Gilg)的枝葉加工而成。臨床上用于高血壓治療，療效顯著。有關(guān)其化學(xué)成分的研究較少，質(zhì)量研究尚屬空白，同時(shí)未見霉茶主要活性部位制劑的研究。鑒于此，本文對(duì)霉茶主要降血壓活性成分、霉茶藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、霉茶降血壓活性部位緩釋片的制各、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、藥效及其藥物代謝動(dòng)力學(xué)等多個(gè)方面進(jìn)行了研究，從而為霉茶的全面深入開發(fā)奠定了相應(yīng)基礎(chǔ)。 在降血壓活性成分研究方面，依次

2、采用氯仿、乙酸乙酯萃取95％乙醇提取的霉茶浸膏，分別從氯仿、乙酸乙酯萃取及水溶液部分分離出15個(gè)化合物，鑒定出12個(gè)化合物：β-谷甾醇(β-sitosterol，Ⅱ)、齊墩果酸(Oleanolicacid，Ⅲ)、花旗松素(Taxifolin，Ⅵ)、槲皮素(Quercetin，Ⅶ)、兒茶素((+)-catechin，Ⅷ)、楊梅素(myricetin，化合物Ⅸ)、蛇葡萄素(ampelopsin，Ⅹ)、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷(Que

3、rceetin-3-O-α-L-rhamnoside，Ⅺ)、楊梅苷(myricetrin，Ⅻ)、豆甾醇-3-O-α-D-葡萄糖(stigmasterol-3-O-α-D-glucoside，ⅩⅢ)、沒食子酸(Gallicacid，ⅩⅣ)、沒食子酸乙酯(Ethylgallate，ⅩⅤ)。其中除蛇葡萄素外，均為首次從該植物中分得。 以分離得到的蛇葡萄素、楊梅素為對(duì)照品，對(duì)霉茶及其原植物大葉蛇葡萄進(jìn)行了定性鑒別，建立了專屬性鑒別方法;

4、以蛇葡萄素為對(duì)照品，在311nm波長(zhǎng)處采用紫外分光光度法測(cè)定霉茶及其原植物中總黃酮的含量；采用反相高效液相法對(duì)霉茶及其原植物不同部位中蛇葡萄素、楊梅素的含量進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果表明，霉茶中總黃酮含量和主要有效成分蛇葡萄素含量較高，霉茶及其原植物中總黃酮的含量分別為33.72％和40.32％，霉茶、原植物莖和原植物枝葉中蛇葡萄素含量分別為27.3％、16.81％和29.1％；霉茶、原植物莖和原植物枝葉中楊梅素含量分別為4.56％、2.23％和

5、2.54％。不同采收時(shí)間樣品中總黃酮、蛇葡萄素、楊梅素的含量比較結(jié)果顯示，藥材比較合適的采收時(shí)間是4月至5月下旬，6月份起這些成分含量均開始下降，從而為藥材的合理采收和應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。HPLC指紋圖譜中發(fā)現(xiàn)不同采收時(shí)間藥材成分組成沒有差異，共有峰12個(gè)，特征指紋峰有3個(gè)--蛇葡萄素、楊梅素、槲皮素，這為后期藥材提取和有效部位制劑研究奠定了基礎(chǔ)。 在此基礎(chǔ)上，比較了水煎煮和乙醇提取工藝的優(yōu)劣，通過正交設(shè)計(jì)和單因素比較，優(yōu)選了霉茶的

6、降血壓有效部位群總黃酮提取工藝、澄清工藝和純化工藝--藥材加9倍量的70％的乙醇，回流3次，每次60分鐘，過濾，合并濾液，藥液濃縮至藥材重量：濃縮液體積為1:6，于60℃攪拌下加入0.25％的殼聚糖醋酸溶液至0.65％(即100克霉茶藥材需加入0.65克的殼聚糖)，靜置12小時(shí)，過濾；然后采用非極性樹脂SP850，上樣量為18倍柱體積的霉茶溶液(5.0mg·mL-1)，2倍柱體積水沖洗后，用5倍柱體積70％乙醇進(jìn)行洗脫，洗脫液減壓濃縮，

7、干燥，粉碎，即得霉茶總黃酮有效部位提取物。對(duì)霉茶總黃酮提取物進(jìn)行質(zhì)量控制，測(cè)定了其總黃酮、蛇葡萄素、楊梅素的含量，并進(jìn)行定性鑒別，結(jié)果所制霉茶總黃酮提取物的總黃酮含量不低于78％，蛇葡萄素的含量不低于44％，楊梅素的含量不低于11％。通過對(duì)緩釋片溶出度的考察，優(yōu)選霉茶緩釋片的成型工藝--確定了使用HPMC(E15)為骨架材料、乳糖為填充劑、4％CMC-Na為粘合劑，處方比例為霉茶總黃酮：HPMC(E15)：乳糖=7.5：1.5:1，采用

8、濕法制粒壓片，片子硬度6～8Kg，片重為0.5g;質(zhì)量控制研究中既采用了傳統(tǒng)的定性、定量方法，又結(jié)合中藥制劑的特點(diǎn)建立了相應(yīng)的指紋圖譜，建立了霉茶緩釋片的綜合評(píng)價(jià)系統(tǒng)；通過總黃酮的含量測(cè)定，考察霉茶緩釋片的體外釋放機(jī)制：暫定每片霉茶緩釋片中總黃酮的含量不少于230mg，蛇葡萄素的含量不少于130mg；初步確定本品2h釋放15～25％，4h釋放40～50％，10h釋放不小于85％。體外釋放機(jī)制的研究：將體外累積釋放度進(jìn)行3種曲線擬合，確定

9、其體外釋放模型為零級(jí)釋放。通過對(duì)Peppas方程的計(jì)算，確定其釋放機(jī)制為骨架溶蝕和藥物擴(kuò)散的綜合，為屏障控釋過程。 為了更好地推進(jìn)霉茶的研究和應(yīng)用，本文在霉茶緩釋片工藝和質(zhì)量體系建立基礎(chǔ)上，進(jìn)行了相應(yīng)的降血壓藥效學(xué)及其代謝動(dòng)力學(xué)研究。以腎性高血壓大鼠模型為研究對(duì)象，觀察霉茶緩釋片口服給藥對(duì)腎性高血壓大鼠血壓、血漿及心肌組織中腎素(PRA)、血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)、內(nèi)皮素(ET)、血漿中降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)、血清中一氧化

10、氮(NO)、心臟/體重比及腎、心、腦組織病理的影響，探討其對(duì)腎性高血壓大鼠的降壓機(jī)制；從蛇葡萄素的體內(nèi)代謝過程以及體外蛋白結(jié)合率等角度進(jìn)行有效部位的代謝研究。 結(jié)果藥物高中低3個(gè)劑量組與陽性藥相比較具有類似的藥理作用(P＞0.05)，可使腎性高血壓大鼠的血壓降至正常水平，并使腎入球小動(dòng)脈壁厚度顯著變薄，心肌細(xì)胞橫截面積顯著減小，并且能夠減輕甚至逆轉(zhuǎn)高血壓大鼠心血管系統(tǒng)以及靶器官的病理改變，其降壓作用是通過對(duì)內(nèi)皮素、NO、血管緊張