FITC-SiO2復(fù)合納米粒子的制備及其在生物分析中的應(yīng)用.pdf

1、近年來(lái)，納米發(fā)光復(fù)合材料倍受關(guān)注，并作為發(fā)光探針應(yīng)用于各種生物檢測(cè)中。與傳統(tǒng)有機(jī)染料相比，發(fā)光納米粒子的發(fā)光更強(qiáng)、穩(wěn)定性更高。為了方便對(duì)納米粒子進(jìn)行表面修飾，通常制成核殼型復(fù)合納米粒子，其中以二氧化硅為外殼的復(fù)合熒光納米粒子因具有良好的水溶性、生物親和性、易于制備、分離和表面修飾，作為標(biāo)記物應(yīng)用于生物分析，可以顯著提高檢測(cè)的靈敏度，有望發(fā)展成為一類(lèi)新型的具有巨大發(fā)展前景的發(fā)光生物標(biāo)記材料。
　　本研究采用反相微乳液法合成熒光素-二

2、氧化硅復(fù)合納米粒子(FITC/SiO2composite nanoparticles)，確定了前驅(qū)物(FITC-APS)的最佳加入量。研究結(jié)果表明，在常溫下，微乳液的最佳配比為正硅酸乙酯∶環(huán)己烷∶正己醇∶曲拉通=0.1∶10∶4∶4，合成的熒光素-二氧化硅復(fù)合納米粒子一周之后的熒光強(qiáng)度為原來(lái)的90％。對(duì)制備的納米粒子進(jìn)行表征，TEM實(shí)驗(yàn)表明合成粒子的分散性良好，合成粒子的粒徑在80nm左右，與粒度分布實(shí)驗(yàn)結(jié)果基本一致。IR光譜表明，合成

3、粒子表面具有氨基。研究發(fā)現(xiàn)，能否形成穩(wěn)定的復(fù)合納米粒子，與殼層厚度沒(méi)有很大的關(guān)系，主要是由兩者的電性決定的。并不是所有的親水性材料都能直接通過(guò)微乳液法形成穩(wěn)定的復(fù)合納米粒子，但可以通過(guò)改變實(shí)驗(yàn)條件調(diào)節(jié)相關(guān)材料的電性來(lái)實(shí)現(xiàn)。
　　用制備的納米粒子檢測(cè)牛血清白蛋白，確定了最佳檢測(cè)條件，在0.050-0.55μg/mL的濃度范圍內(nèi)，納米粒子的熒光強(qiáng)度與BSA的濃度有較好的線性關(guān)系，線性方程為y=578.42c+10.99，相關(guān)系數(shù)r=0

4、.9789，檢出限為14μg/L。對(duì)濃度為0.40mg/L的BSA進(jìn)行了11次平行測(cè)定，RSD為2.5％。
　　在pH為8.50的磷酸緩沖溶液中，復(fù)合納米粒子可以與親和素通過(guò)靜電引力結(jié)合。被標(biāo)記的親和素仍然保持原有的生物活性，并且和生物素存在特異性結(jié)合。以濾膜為載體，被標(biāo)記的親和素-生物素復(fù)合物的熒光強(qiáng)度與親和素在0.2-1.4μg/mL的濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)較好的線性關(guān)系，回歸方程為y=355.91c+107.58，相關(guān)系數(shù)r=0.9