CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞在膽石癥合并非酒精性脂肪性肝病發(fā)病中的作用及意義.pdf

1、目的:檢測合并非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的膽石癥(GD)患者外周血及肝內(nèi)的CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞(Tregs)水平,并與單純膽石癥患者、單純非酒精性脂肪性肝病患者及正常對照組進行比較,旨在探討在膽石癥與非酒精性脂肪性肝病發(fā)病過程中體內(nèi)TregsT細胞的變化,為研究非酒精性脂肪性肝病合并膽石癥的免疫發(fā)病機制及為非酒精性脂肪性肝病合并膽石癥患者臨床診療提供新的思路。
　　 方法:
　　 收集2009年9月-20

2、10年12月在我院治療的合并非酒精性脂肪性肝病的膽石癥患者患者30例,單純膽石癥患者40例(ALT＜40 U/L),單純非酒精性脂肪性肝病患者20例,并選擇同期在我院體檢的正常對照20例。所有患者均無飲酒史,并且實驗室檢查均無病毒性肝炎感染史。GD患者均由超聲檢查及術(shù)后病理證實,肝細胞脂肪變性經(jīng)超聲檢查及肝組織病理證實。非酒精性脂肪性肝病的診斷依據(jù)2006中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會脂肪肝與酒精肝學(xué)組《非酒精性脂肪性肝病診療指南》。
　　

3、 應(yīng)用全自動生化分析儀檢測血清ALT水平及肝功能、血脂、血糖等。并檢測抗-HBV、抗-HAV、抗-HCV、抗-HDV、抗-HEV、抗-HIV,以除外其它嗜肝病毒感染。
　　 取外周肝素抗凝血,應(yīng)用CD4、CD25免疫熒光抗體染色,紅細胞裂解液溶解紅細胞,完全溶血后加0.02M磷酸鹽緩沖液洗滌,應(yīng)用加多聚甲醛一磷酸鹽緩沖液固定,重新懸浮細胞,上流式細胞儀檢測,淋巴細胞設(shè)門,分析CD4+T細胞中CD4+CD25+T細胞的百分比。<

4、br>　　 HE染色觀察肝細胞病理變化。
　　 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測肝組織內(nèi)Foxp3 mRNA表達。
　　 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件分析實驗數(shù)據(jù),組間比較采用Kruskal-WallisH檢驗或Mann-Whitney U檢驗,兩組間構(gòu)成比的比較采用X2檢驗,雙側(cè)P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1：各組人群的一般資料及ALT水平:非酒精性脂肪肝性肝病患者及膽石癥患者體質(zhì)量指

5、數(shù)(BMI)、空腹血糖(FPG)、甘油三酯(TG)均高于對照組(均P＜0.05),實驗組間比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05),各組年齡及性別無明顯差異。合并非酒精性脂肪性肝病的膽石癥患者及單純非酒精性脂肪性肝病患者ALT水平明顯升高,兩組間ALT水平比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05),單純膽石癥患者ALT水平與正常對照組ALT水平均在正常范圍(＜40 U/L)。
　　 2：外周血CD4+CD25+T細胞水平:合并非酒精性

6、脂肪性肝病的膽石癥患者組(0.049±0.013)、單純非酒精性脂肪性肝病患者組(0.047±0.015)、單純膽石癥患者組(0.036±0.009)CD4+CD25+T細胞百分比均高于正常對照組(0.025+0.011)(均P＜0.05);合并非酒精性脂肪性肝病的膽石癥患者組和單純非酒精性脂肪性肝病患者組CD4+CD25+Tregs百分比高于單純膽石癥患者組(P＜0.05);非酒精性脂肪性肝病患者中根據(jù)ALT水平高低(ALT≥80 U

7、/L和ALT＜80 U/L)分為高ALT水平組與低ALT水平組,發(fā)現(xiàn)高ALT水平組(0.052±0.015)CD4+CD25+Tregs百分比高于低ALT水平組(0.043±0.017)(P＜0.05);在高ALT水平組中合并非酒精性脂肪性肝病的膽石癥患者組(0.057±0.012)CD4+CD25+Tregs百分比高于單純非酒精性脂肪性肝病患者組(0.051±0.008)(P＜0.05);在低ALT水平組中合并非酒精性脂肪性肝病的膽石

8、癥患者組(0.042±0.007)CD4+CD25+Tregs百分比與單純非酒精性脂肪性肝病患者組(0.041±0.013)比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 3：普通病理及Foxp3 mRNA的逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測:各研究組均進行了肝組織活檢,其中合并非酒精性脂肪性肝病的膽石癥患者組和單純非酒精性脂肪性肝病組肝組織均有不同程度的脂肪變,以中央靜脈周圍最為明顯,多呈大泡性,肝細胞體積較正常明顯增加,腫脹,細胞質(zhì)內(nèi)充

9、滿脂肪空泡,細胞核偏位,脂變肝細胞界限不清,肝竇變窄。合并非酒精性脂肪性肝病的膽石癥患者組(0.51±0.12)肝內(nèi)Foxp3 mRNA的表達高于單純非酒精性脂肪性肝病患者組(0.14±0.08)和單純膽石癥患者組(0.12±0.07)(P＜0.05),單純非酒精性脂肪性肝病患者組和單純膽石癥患者組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05),高ALT水平組(0.63±0.06)Foxp3 mRNA的表達高于低ALT水平組(0.31±0.05

10、)(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1：外周血CD4+CD25+T細胞水平:合并非酒精性脂肪性肝病的膽石癥患者組及單純非酒精性脂肪性肝病患者組、單純膽石癥患者組CD4+CD25+T細胞百分比均高于正常對照組(均P＜0.05);合并非酒精性脂肪性肝病的膽石癥患者組和單純非酒精性脂肪性肝病患者組CD4+CD25+Tregs百分比高于單純膽石癥患者組(P＜0.05);非酒精性脂肪性肝病患者中根據(jù)ALT水平高低(ALT≥8

11、0 U/L和ALT＜80 U/L)分為高ALT水平組與低ALT水平組,發(fā)現(xiàn)高ALT水平組CD4+CD25+Tregs百分比高于低ALT水平組(P＜0.05);在高ALT水平組中合并非酒精性脂肪性肝病的膽石癥患者組CD4+CD25+rregs百分比高于單純非酒精性脂肪性肝病患者組(P＜0.05);在低ALT水平組中合并非酒精性脂肪性肝病的膽石癥患者組CD4+CD25+Yregs百分比與單純非酒精性脂肪性肝病患者組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P

12、＞0.05)。表明Tregs參與非酒精性脂肪性肝病與膽石癥的共同發(fā)病,而且Tregs與非酒精性脂肪性肝病患者肝臟炎癥活動密切相關(guān),在非酒精性脂肪性肝病進展中發(fā)揮重要作用。
　　 2：合并非酒精性脂肪性肝病的膽石癥患者組肝內(nèi)Foxp3 mRNA的表達高于單純非酒精性脂肪性肝病患者組和單純膽石癥患者組(P＜0.05),單純非酒精性脂肪性肝病患者組和單純膽石癥患者組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05),高ALT水平組Foxp3 mR