脂肪細(xì)胞因子及脂聯(lián)素受體在大鼠非酒精性脂肪性肝病發(fā)病中的作用研究.pdf

1、目的：為了研究NAFLD的發(fā)生及其嚴(yán)重程度與脂聯(lián)素、瘦素、抵抗素等脂肪細(xì)胞因子和肝臟脂聯(lián)素受體mRNA的關(guān)系，以高脂飲食誘導(dǎo)大鼠不同程度NAFLD的動(dòng)物模型，用ELISA的方法檢測(cè)其血清脂聯(lián)素、瘦素和抵抗素，用RT-PCR的方法檢測(cè)其肝臟脂聯(lián)素受體mRNA的表達(dá)；通過(guò)羅格列酮干預(yù)后，觀察NAFLD病變程度的變化，以及相應(yīng)血清脂肪細(xì)胞因子和肝臟脂聯(lián)素受體mRNA表達(dá)的變化。以此研究NAFLD的發(fā)病機(jī)制，探討脂肪細(xì)胞因子、尤其脂聯(lián)素及其受體

2、在NAFLD的發(fā)病中的作用，并作為NAFLD防治的新靶點(diǎn)提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：將80只雄性SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照(C)組、高脂飲食(88％普通飼料+10％豬油+2％膽固醇，F(xiàn))組和高脂飲食+羅格列酮(R)組，于第2、4、8、12周末分別處死6只正常對(duì)照和10只高脂飲食大鼠。R組于高脂飲食喂養(yǎng)至第9周初時(shí)予羅格列酮3 mg.kg<'-1>.d<'-1>灌胃，給藥4周末處死，同期C組和F組大鼠予等量配藥溶劑灌胃。所有動(dòng)物禁食10

3、小時(shí)后腹腔注射戊巴比妥鈉(45 mg/kg體重)麻醉后開胸、腹；心臟穿刺取血，全血室溫下靜置半小時(shí)，4℃ 3000rpm離心15分鐘后取血清置于-80℃保存，最后統(tǒng)一行ELISA檢測(cè)脂聯(lián)素、瘦素和抵抗素水平；抽血后取全肝，稱取肝濕重，并立即切取肝右葉同一部位肝臟組織，立即置于10％中性福爾馬林中固定，行組織切片病理檢查，剩余肝組織液氮速凍后置于-80℃冰箱保存，抽提總RNA后進(jìn)行脂聯(lián)素受體R1和R2的RT-PCR檢測(cè)。 結(jié)果：各

4、組大鼠體重均逐漸增加，C組與同期F組間無(wú)顯著差異(P>0.05)；F組大鼠肝濕重和肝指數(shù)均較同期C組顯著升高(P<0.05)。肝組織病理染色顯示F組大鼠肝細(xì)胞增大，細(xì)胞索排列紊亂，胞質(zhì)內(nèi)脂滴沉積，并隨高脂飲食時(shí)間延長(zhǎng)脂滴增大增多，早期出現(xiàn)細(xì)泡性空泡變性，后期出現(xiàn)大泡性空泡變性，高脂飲食4周時(shí)出現(xiàn)少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，8周時(shí)大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，并有點(diǎn)片狀壞死，12周時(shí)竇周少量纖維化形成。病理評(píng)分結(jié)果提示隨高脂飲食時(shí)間的延長(zhǎng)肝臟脂肪變性、炎癥評(píng)分和纖

5、維化評(píng)分升高。(1)與C組相比，F(xiàn)組大鼠的血清轉(zhuǎn)氨酶和血脂水平均明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，血清脂聯(lián)素水平逐漸降低，自第2周起即有顯著性差異(F組3.96±0.48 mg/ml vs C組5.48±2.46 mg/ml，P<0.01)；血清瘦素水平逐漸升高，至第12周時(shí)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F組6.39±1.25 ng/ml vs C組3.90±0.40ng/ml，P<0.01)；抵抗素水平逐漸降低，至第4周時(shí)差異顯著(F組24.98

6、±5.21ng/ml vs C組44.05±2.85 ng/ml，P<0.01)；肝臟脂聯(lián)素受體AdipoR1 mRNA與β-actin mRNA的比值逐漸上升，至第4周起差異顯著(F組0.449±0.057 vs C組0.436±0.025 P<0.01)，AdipoR2 mRNA與β-actin mRNA的比值逐漸下降，至第2周起差異顯著(F組0.504±0.006 vs C組0.556±0.028 P<0.01)。 (2)與同期F

7、組相比，用羅格列酮干預(yù)4周后，R組體重、肝濕重和肝指數(shù)均無(wú)顯著差異，肝臟脂肪變性無(wú)明顯改善(P>0.05)，炎癥、纖維化評(píng)分有所降低，但差異不顯著(P>0.05)。R組的AST和血脂水平有所改善(P<0.05)，血清脂聯(lián)素水平升高(R組6.98±1.02 mg/ml vs F組3.77±0.61 mg/ml，P<0.01)，瘦素水平升高，抵抗素水平降低，但后兩者差異不顯著(P>0.05)；肝脂聯(lián)素受體mRNA表達(dá)無(wú)明顯變化(均P>0.0