重組人CD22單克隆抗體SM03治療CD22陽性B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤實(shí)驗(yàn)和臨床研究.pdf

1、非霍奇金淋巴瘤(non—Hodgkin's lymphoma,NHL)是起源于淋巴細(xì)胞不同分化階段的一組異質(zhì)性(heterogeneity)惡性腫瘤。在過去的30年里,非霍奇金淋巴瘤在世界范圍內(nèi)的發(fā)病率幾乎增長了一倍,使之成為繼肺癌和黑素瘤之后第3個(gè)增長最快的癌癥。在美國,2008年新診斷NHL病例估計(jì)有66120例,已成為第5位的常見惡性腫瘤。NHL大多為B細(xì)胞性,在美國,B細(xì)胞HLN的比例約80～85％,我的T細(xì)胞NHL的比例較西方

2、為高,約為30％。
　　 化療是非霍奇金淋巴瘤主要的傳統(tǒng)治療方法,由于受細(xì)胞毒藥物副作用的限制,很難再進(jìn)一步提高化療藥物的劑量,另一方面,有研究也表明,傳統(tǒng)細(xì)胞毒化療藥物進(jìn)一步提高非霍奇金淋巴瘤臨床療效的空間也十分有限了。靶向免疫治療提高了NHL的治療效果。研究表明美羅華聯(lián)合CHOP方案治療老年彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤,治療組和對照相比,5年的DFS提高21％(66％vs45％),5年的總生存提高13％(58％vs43％)。
　

3、　 重組人CD22單克隆抗體(代碼:SM03)是由深圳龍瑞藥業(yè)有限公司開發(fā)。SM03是一個(gè)人-鼠嵌合化IgG1單克隆抗體,由鼠源抗體重鏈和輕鏈可變區(qū)(VariableRegions)、和人源抗體kappa輕鏈和gamma-1重鏈恒定區(qū)(Kappa/IgG1 ConstantRegions)構(gòu)成。重組人CD22單克隆抗體分子量為148 kD,能特異的識(shí)別并結(jié)合正常的和惡性B淋巴細(xì)胞表膜抗原CD22。SM03和惡性B淋巴細(xì)胞表膜抗原CD2

4、2結(jié)合后,進(jìn)而通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡(apoptosis)、抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒(ADCC)等免疫效應(yīng)機(jī)制,殺傷腫瘤細(xì)胞。
　　 CD22是一個(gè)分子量135-kd的唾液酸糖蛋白,并嚴(yán)格局限表達(dá)在分化成熟的B-細(xì)胞表面。一旦表達(dá)為膜蛋白,CD22持續(xù)存在、直至分化成熟為漿細(xì)胞,在B-細(xì)胞的分化、發(fā)育、成熟過程中起關(guān)鍵作用。CD22在淋巴濾泡斗笠區(qū)(mantle)和B細(xì)胞生發(fā)中心邊緣區(qū)表達(dá)程度高。CD22在B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤廣泛

5、表達(dá),其確切功能目前尚不清楚。研究表明其對于B細(xì)胞的存活有重要作用。B細(xì)胞CD22無表達(dá)的鼠,其B細(xì)胞凋亡加速,壽命縮短。由于CD22表達(dá)嚴(yán)格地局限于成熟和癌變的B細(xì)胞表面,與CD20分布相似,因此使得CD22成為繼CD20后可用于新藥開發(fā)而令人注目的抗原靶點(diǎn)。
　　 Epratuzumab(依帕珠單抗)是一個(gè)特異性抗B淋巴細(xì)胞CD22抗原特異性表位的人源化單克隆抗體。Epratuzumab治療非霍奇金淋巴瘤的Ⅰ—Ⅱ期臨床研究已

6、經(jīng)完成,已經(jīng)進(jìn)入Ⅲ期臨床研究階段。已完成的Ⅰ/Ⅱ期臨床試驗(yàn)顯示,Epratuzumab起始劑量從120mg/m2到1000mg/m2,每周一次,連用4周給藥,患者耐受良好,少數(shù)在輸注后出現(xiàn)1或2級(jí)不良反應(yīng),主要是首次輸液時(shí)畏寒、寒顫、惡心和低血壓。Epratuzumab在人體血清半衰期較長,為23.9天。在240 mg/m2和360 mg/m2劑量級(jí)可以獲得明顯的臨床抗腫瘤療效。對于濾泡型或復(fù)發(fā)進(jìn)展型非霍奇金淋巴瘤,Epratuzuma

7、b治療后均可獲得一定療效,甚至對美羅華治療失敗的患者,Epratuzumab治療后也可獲得療效,對于濾泡型淋巴瘤效果較好。
　　 SM03由深圳龍瑞藥業(yè)有限公司開發(fā),是人一鼠嵌合化IgG1單克隆抗體。抗NHL的鼠源SM03抗體與Epratuzumab一樣,也是特異于CD22抗原的B表位,鼠源SM03經(jīng)過“嵌合化”或“人源化”改建后,應(yīng)表現(xiàn)與Epratuzumab相似的安全性和臨床療效。
　　 SM03臨床前研究表明,SM

8、03能特異的識(shí)別并結(jié)合正常的和惡性B淋巴細(xì)胞表膜抗原CD22,SM03抗體高度靶向性地與B細(xì)胞組織器官——脾、淋巴結(jié)和惡性淋巴瘤細(xì)胞特異結(jié)合,而與其他正常人體組織器官?zèng)]有交叉反應(yīng)。SM03抗體可以誘導(dǎo)獼猴和食蟹猴外周血CD22+B細(xì)胞清除效應(yīng)。臨床前藥代動(dòng)力學(xué)研究顯示體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)符合二房室模型。
　　 本研究分為四部分:第1部分選擇B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株Raji和Ramos細(xì)胞株,研究SM03體外對于Raji和Ramos細(xì)胞株抑瘤作用

9、,探討PI3K信號(hào)傳導(dǎo)凋亡通路在SM03抗B細(xì)胞淋巴瘤中的作用；第2部分采用免疫組化方法檢測非霍奇金淋巴瘤腫瘤組織CD22抗原的表達(dá)情況,初步探討CD22抗原在非霍奇金淋巴瘤腫瘤組織的表達(dá)和臨床病理特征的關(guān)系,篩選SM03靶向治療的患者；第3部分研究重組人CD22單克隆抗體SM03在中國CD22陽性B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤患者的劑量安全性和耐受性,為確定后續(xù)Ⅱ/Ⅲ期臨床試驗(yàn)用藥劑量和頻次奠定基礎(chǔ),并初步研究中國CD22陽性B細(xì)胞非霍奇金淋巴

10、瘤患者對SM03的初步的抗腫瘤療效反應(yīng)；第4部分采用競爭ELISA法研究SM03在中國CD22陽性B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤患者的的藥代動(dòng)力學(xué)行為,并計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù),考察重組SM03藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)和中國CD22陽性B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤患者對SM03的療效反應(yīng)和毒性的關(guān)系,為Ⅱ期臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)合理給藥方案和臨床安全有效用藥提供理論依據(jù)。
　　 第1部分重組人CD22單抗隆抗體SM03對人B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤細(xì)胞株的體外抑瘤作用以及抑瘤

11、機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究目的:研究重組人CD22單克隆抗體(SM03)對B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤細(xì)胞株的體外生長抑制作用,探討PI3K信號(hào)傳導(dǎo)凋亡通路在SM03抗人B細(xì)胞淋巴瘤中的作用。
　　 方法:選擇B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株Raji和Ramos細(xì)胞株,流式細(xì)胞儀檢測Raji和Ramos細(xì)胞的CD22抗原表達(dá)量,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的凋亡率和周期分布；采用CCK-8法測定SM03對Ramos和Raji細(xì)胞生長抑制作用；并采用Western blot

12、法檢測Raji和Ramos細(xì)胞株Bcl-2、Bax、Bcl-xL、Mcl-1、Akt及p-Akt蛋白的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:SM03對Raji和Ramos細(xì)胞株的體外抑瘤作用均較弱。SM03在0—400μg/ml濃度范圍內(nèi)對Raji細(xì)胞的抑制率為26.18～31.84％,平均值為30.64±3.26％,SM03在0—400μg/ml濃度范圍內(nèi)對Ramos細(xì)胞的抑制率為2.67～22.47％,平均值為11.93±9.96％。

13、r>　　 SM03在25、50、100μg/ml的劑量下并不引起Ramos細(xì)胞的凋亡,亞G1期細(xì)胞所占的比例分別為1.6％、2.0％、1.8％和2.2％；SM03在25、50、100μg/ml的劑量能引起Raji細(xì)胞的凋亡,亞G1期細(xì)胞所占的比例分別為4.6％、6.9％、13.7％和17.6％；相同條件下均未能對兩種細(xì)胞的周期分布產(chǎn)生影響。
　　 在Ramos細(xì)胞中未檢測到Bcl-2蛋白的表達(dá)；p—Akt蛋白在兩株細(xì)胞中均未檢

14、測到表達(dá)；SM03未能對Bcl-2家族蛋白(Bax、Bcl-2、Bcl-xL及Mcl-1蛋白)在Ramos和Raji細(xì)胞的表達(dá)產(chǎn)生影響；Akt蛋白在Raji細(xì)胞中觀察到隨SM03劑量的增加其表達(dá)量逐漸減少；Akt蛋白在Ramos細(xì)胞中未檢測明顯的變化。
　　 結(jié)論:SM03體外對B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株的抑瘤作用較弱。在25、50、100μg/ml的劑量能引起Raji細(xì)胞的凋亡,并能抑制Akt蛋白的表達(dá),但對p-Akt并不產(chǎn)生影響,對

15、Bcl-2家族蛋白表達(dá)不產(chǎn)生影響。SM03不通過PI3K/Akt信號(hào)通路和Bcl-2家族蛋白凋亡途徑誘導(dǎo)Raji細(xì)胞的凋亡。
　　 第2部分 B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤腫瘤組織CD22抗原表達(dá)檢測及臨床意義目的:檢測CD22抗原在非霍奇金淋巴瘤腫瘤組織中的表達(dá),初步探討CD22抗原在非霍奇金淋巴瘤腫瘤組織的表達(dá)和臨床病理特征的關(guān)系,篩選SM03靶向治療的患者。
　　 方法:采用免疫組化方法檢測B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤腫瘤組織CD2

16、2抗原的表達(dá),初步探討腫瘤組織CD22抗原表達(dá)和臨床病理特征等的關(guān)系。
　　 結(jié)果:CD22抗原可以采用免疫組化方法在B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤腫瘤組織中檢測出,陽性表達(dá)的棕黃色或棕褐色顆粒主要見于細(xì)胞漿和細(xì)胞膜。全組21例,陰性0例,弱陽性(+)11例,中等陽性(++)7例,強(qiáng)陽性(+++)3例,高表達(dá)10例,低表達(dá)11例,陽性率100.00％(21/21),中等陽性率33.33％(7/21),強(qiáng)陽性率14.29％(3/21)。

17、r>　　 全組8例彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者,腫瘤組織中CD22抗原呈弱陽性表達(dá)2例,中等陽性表達(dá)4例,強(qiáng)陽性表達(dá)2例；8例濾泡性淋巴瘤患者,弱陽性表達(dá)7例,中等陽性表達(dá)1例；2例濾泡轉(zhuǎn)彌漫的非霍奇金淋巴瘤患者,1例為中等陽性的表達(dá),1例為強(qiáng)陽性表達(dá),2例慢性淋巴細(xì)胞白血病/小淋巴細(xì)胞淋巴瘤患者,腫瘤組織CD22表達(dá)均為弱陽性。1例伯基特淋巴瘤患者,腫瘤組織CD22抗原呈中等陽性表達(dá)。
　　 全組21例患者,20例可評(píng)價(jià)療效。4例

18、臨床療效評(píng)價(jià)進(jìn)展的患者,腫瘤組織中CD22高表達(dá)3例,低表達(dá)1例。1例觀察期結(jié)束后續(xù)隨訪臨床療效獲得PR的患者,腫瘤組織中CD22抗原為弱陽性表達(dá)。
　　 結(jié)論:CD22抗原在B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤中廣泛表達(dá),可以采用免疫組化的方法檢測出,檢測方法簡單、易行,可用于臨床作為B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤免疫標(biāo)記檢測,CD22表達(dá)和臨床病理特征的關(guān)系需進(jìn)一步研究。
　　 第3部分重組人CD22單克隆抗體SM03治療CD22陽性B細(xì)胞非

19、霍奇金淋巴瘤Ⅰ期臨床試驗(yàn)的耐受性研究目的:研究重組人CD22單克隆抗體SM03在中國CD22陽性B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤患者的劑量安全性和耐受性,為確定后續(xù)Ⅱ/Ⅲ期臨床試驗(yàn)用藥劑量和頻次奠定基礎(chǔ);初步考察SM03對中國B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤患者的初步療效反應(yīng)以及免疫學(xué)影響。
　　 方法:SM03從低劑量60mg/m2開始,按照60mg/m2,120 mg/m2,240 mg/m2,360 mg/m2,480 mg/m2劑量級(jí),劑量循序

20、漸進(jìn),逐步爬升,每個(gè)劑量級(jí)入組1～6例患者,采用多劑量給藥,SM03加入250ml生理鹽水中,恒速滴注3小時(shí),每周給藥1次,連續(xù)4周給藥,考察SM03的臨床安全性和耐受性。SM03治療第28天,采用CT或MR檢查評(píng)價(jià)SM03治療效果。
　　 結(jié)果:從2007年4月至2008年11月,21例在中山大學(xué)腫瘤防治中心治療的CD22陽性B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤患者入組。21例患者中,男10例,女11例,年齡范圍24～67歲,中位年齡52歲,

21、體力情況0～2級(jí)。全組21例患者,共進(jìn)行87次SM03給藥,其中360mg/m2劑量組1例患者進(jìn)行2個(gè)療程共8次SM03給藥,240mg/m2劑量組1例患者因發(fā)生SAE只進(jìn)行3次SM03治療。入組21例患者,均出現(xiàn)不同程度的不良事件。藥物相關(guān)的不良反應(yīng)輕微,多為1～2級(jí)。常見不良事件包括:發(fā)熱、疲勞、胃納下降、皮疹、失眠癥、注射局部皮膚改變、腫瘤部位疼痛、肝腎功能損害、白細(xì)胞降低、血紅蛋白下降、淋巴細(xì)胞減少、蛋白尿、尿潛血、尿白細(xì)胞增多

22、、部分凝血活酶時(shí)間延長和心肌勞損等。其中60mg/m2劑量組1例完成4次給藥后,觀察期發(fā)生咽喉部大出血(與試驗(yàn)藥物可能無關(guān),己按照嚴(yán)重不良事件報(bào)告),240mg/m2劑量組1例3次給藥后,發(fā)生上消化道大出血(與試驗(yàn)藥物可能無關(guān),已按照嚴(yán)重不良事件報(bào)告),給予退組,120mg/m2劑量組1例4次給藥后腫瘤明顯進(jìn)展,腫瘤致疼痛非常明顯,給予退出觀察,進(jìn)行化療處理。360mg/m2劑量組出現(xiàn)1例劑量限制性毒性,表現(xiàn)為4級(jí)中性粒細(xì)胞減少,480

23、mg/m2劑量級(jí)患者,50％(3/6)出現(xiàn)局部注藥部位皮膚改變。沒有出現(xiàn)MTD。21例入組患者中,按照1998年國際工作組淋巴瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn),20例可評(píng)價(jià)療效,4患者腫瘤進(jìn)展,16例SD。進(jìn)展的4例患者,病理類型均為彌漫大B,療效SD的患者,多數(shù)病例,目標(biāo)病灶雙徑乘積之和(SPD)治療后稍有減小,病理類型為濾泡型淋巴瘤的患者,療效稍好,1例濾泡型淋巴瘤在SM03試驗(yàn)方案完成后的隨訪中,腫瘤明顯減小,療效達(dá)PR。360mg/m2和480m

24、g/m2劑量組SM03治療后SPD縮小患者的比例較高。
　　 結(jié)論:SM03耐受性研究表明,SM03在中國CD22陽性B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤患者,安全性和耐受性良好；初步顯示了SM03對中國CD22陽性B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤患者有一定的抗腫瘤活性,有一定的清除B淋巴細(xì)胞的作用,對細(xì)胞和體液免疫沒有明顯影響；推薦360mg/m2和480mg/m2作為進(jìn)一步研究研究劑量。
　　 第4部分重組人CD22單克隆抗體SM03治療CD2

25、2陽性B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤Ⅰ期臨床試驗(yàn)的藥代動(dòng)力學(xué)研究目的:考察重組人CD22單克隆抗體SM03在中國CD22陽性的B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤患者體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)行為。為Ⅱ期臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)合理給藥方案和臨床安全有效用藥提供理論依據(jù)。
　　 方法:20例中國CD22陽性B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤患者,爬坡依次進(jìn)入60mg/m2,120 mg/m2,240 mg/m2,360 mg/m2,480 mg/m25個(gè)SM03劑量級(jí),采用競爭性ELISA

26、法檢測的SM03血漿藥物濃度,并計(jì)算SM03藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù),描述SM03在中國CD22陽性B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤的藥代動(dòng)力學(xué)行為。
　　 結(jié)果:從2007年4月至2008年11月,20例在中山大學(xué)腫瘤防治中心治療的CD22陽性B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤患者入組。20例患者中,女性患者10例,男性患者10例,年齡范圍24～62歲,中位年齡52歲,均值±標(biāo)準(zhǔn)差:52±9.80歲,身高范圍:146.5～174.5cm,均值±標(biāo)準(zhǔn)差:160.7

27、5±8.60cm；體重范圍:37.5～77 kg,均值±標(biāo)準(zhǔn)差:56.95±11.06 kg；體表面積:1.25～1.89 m2,均值±標(biāo)準(zhǔn)差:1.60±0.18 m2；體重指數(shù):16.88～27.06 kg/m2,均值±標(biāo)準(zhǔn)差:21.88±3.11kg/m2。ELISA法滿足SM03藥代動(dòng)力學(xué)研究的要求。SM03溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線四參數(shù)方程為y=POWER(x,1/-1.1134)*24.8812,兩者的斜率、截距具有很好的相關(guān)性；批內(nèi)變

28、異系數(shù)CV:5.5～9.6％,批間變異系數(shù)CV:8.1～11.1％,均小于15％,方法的精密度符合藥代動(dòng)力學(xué)方法學(xué)要求；樣本稀釋后測定方法穩(wěn)定,重現(xiàn)性好,準(zhǔn)確度為111.2±0.68％,變異系數(shù)CV:為3.57％;本試驗(yàn)中樣品解凍三次后保持穩(wěn)定性。
　　 對劑各量級(jí)患者在各個(gè)檢測點(diǎn)(0、1、2、3、3.5、5、11、27、51、75、123、147h)血清中SM03濃度,血清SM03濃度-時(shí)間曲線表現(xiàn)為雙指數(shù)曲線,滴注后血清SM

29、03濃度開始迅速升高,給藥結(jié)束后(3小時(shí))左右,血漿SM03達(dá)最高濃度,后開始緩慢下降,下降到接近前一次給藥的低點(diǎn)附近,每次給藥的基線抬高不太明顯。
　　 20例各個(gè)劑量級(jí)中國CD22陽性B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤患者,SM03的主要藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)(Cmax、K、T1/2、Vd、CL、MRT、AUC0-∞、AUC0—t、Vss等)總結(jié)分別見下表。
　　 結(jié)論:采用競爭ELISA法研究SM03在B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤患者的的藥

30、代動(dòng)力學(xué)行為,所建立的方法學(xué)符合藥代動(dòng)力學(xué)測定的規(guī)定要求。
　　 重組人CD22單克隆抗體SM03滴注入中國CD22陽性B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤患者體內(nèi)后,血清中游離SM03濃度-時(shí)間曲線表現(xiàn)為雙指數(shù)曲線,滴注結(jié)束濃度最高,隨著劑量增加Cmax增加,個(gè)體間變異較大。
　　 SM03不同劑量級(jí),血清中游離抗體SM03在中國CD22陽性B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤患者中的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)分別為:
　　 60 mg/m2:Cmax:

31、36.12μg/mL,t1/2:63 h,AUC0-t:2075.163μg/L·h,AUC0-oo:2556.288μg/L·h,MRT0-∞:70.89 h,CL:0.023472 L/h·m2,Vd:2.133776L/m2,Vss:1.6640453 L120 mg/m2:Cmx:(40.77±9.57)μg/mL,t1/2:(196.48±60.1)h,AUC0-t:(112139.9+108390.2)μg/L·h,AUC0

32、-oo:(399554+317301.5)μg/L·h,MRT0-∞:(111.02±7.34)h,CL:(0.018138±0.003136)L/h·m2,Vd:(5.006544±0.683462)L/m2,Vss:(2.002148±0.214966)L240 mg/m2:Cmax:(126.81±23.34)μg/mL,t1/2:(143.36±23.46)h,AUC0-t:(632438.5±218351.9)μg/L·h,A

33、UC0-∞:(2139238±956755.1)μg/L·h,MRT0-∞:(103.55+6.57)h,CL:(0.013341±0.004942)L/h·m2,Vd:(2.676217±0.846733)L/m2,Vss:(1.361334±0.453195)L360 mg/m2:Cmax:(196.03±30.98)μg/mL,t1/2:(194.83±110.48)h,AUC0-t:(1066470±137764.7)μg/L·

34、h,AUC0-∞:(4670989±2652243)μg/L·h,MRT0-∞:(109.29±11.22)h,CL:(0.009825±0.003185)L/h·m2,Vd:(2.38036±0.379625)L/m2,Vss:(1.045803±0.260127)L480 mg/m2:Cmax:(525.81±102.39)μg/mL,t1/2:(324.01+274.41)h,AUC0-t:(3791400±798343)μg/L

35、·h,AUC0-∞:(23185478±25102489)μg/L·h,MRT0-∞:(116.08±18.29)h,CL:(0.005094±0.003653)L/h·m2,Vd:(1.325607±0.268666)L/m2,Vss:(0.539424±0.336782)L隨著SM03劑量的增加,血清中SM03的AUC呈線性增加,在60mg/m2～360mg/m2劑量范圍,AUC(0-t)隨劑量呈線性增加；但在480mg/m2劑量組