CXCL12-CXCR4在肝外膽管癌組織中的表達(dá)及其意義的研究.pdf

1、為探討CXCL12-CXCR4在肝外膽管癌發(fā)生、發(fā)展中的作用機(jī)制。本研究進(jìn)行了以下工作：1、回顧性調(diào)查肝外膽管癌的外科治療和影響預(yù)后的因素。2、采用IHC、RT-PCR、Western blot技術(shù)研究CXCL12-CXCR4在肝外膽管癌組織中的表達(dá)及其臨床病理學(xué)意義。3、采用IHC、RT-PCR技術(shù)研究CXCL12-CXCR4對(duì)肝外膽管癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移以及淋巴管形成的影響。4、研究FOXP3+Treg細(xì)胞在肝外膽管癌中的浸潤(rùn)情況，分析其對(duì)誘

2、導(dǎo)免疫耐受以及預(yù)后的影響。 本研究論文共分為四個(gè)部分： 1、 161例肝外膽管癌的外科治療和預(yù)后分析 目的：探討肝外膽管癌(EHCC)的臨床特征、治療方法對(duì)遠(yuǎn)期生存率的影響及EHCC切除術(shù)后的預(yù)后因素。 方法：對(duì)1995年4月至2006年7月河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院收治的161例EHCC的臨床特點(diǎn)、診斷、手術(shù)方式和隨訪結(jié)果進(jìn)行回顧分析。選擇對(duì)EHCC切除術(shù)后預(yù)后可能產(chǎn)生影響的臨床因素，通過Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型進(jìn)

3、行多因素的預(yù)后分析。 結(jié)果：161例手術(shù)治療的EHCC，根治性切除110例，姑息性切除32例，引流或探查組19例。161例患者總體1、2、3、5年生存率分別為74.9％、45.3％、36.5％和11.1％。Cox分析結(jié)果表明肝臟浸潤(rùn)、門脈或肝動(dòng)脈侵犯和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是EHCC根治切除影響預(yù)后的獨(dú)立因素(P<0.05)。根治性切除是提高EHCC遠(yuǎn)期生存率及改善生活質(zhì)量的關(guān)鍵，肝葉切除和(或)胰十二指腸切除聯(lián)合骨骼化切除是提高根治切除率

4、及遠(yuǎn)期療效的重點(diǎn)。 2、 趨化因子CXCL12及其特異性受體CXCR4在肝外膽管癌組織中的表達(dá)及其意義 目的：探討趨化因子CXCL12及其特異性受體CXCR4表達(dá)對(duì)肝外膽管癌臨床進(jìn)展和預(yù)后的影響以及相互關(guān)系。 方法：分別采用免疫組化、RT-PCR和Western blot方法檢測(cè)CXCL12和CXCR4在82例肝外膽管癌中的表達(dá)，并對(duì)臨床指標(biāo)和預(yù)后進(jìn)行分析。 2.1 肝外膽管癌中CXCL12免疫組化染色結(jié)

5、果 CXCL12表達(dá)于胞漿和胞膜，呈棕黃色。基質(zhì)成纖維細(xì)胞弱表達(dá)。82例肝外膽管癌組織中，CXCL12蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為92.7％，強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)率為25.6％；弱陽(yáng)性率為31.7％；7例膽道良性腫瘤中CXCL12陽(yáng)性表達(dá)率為57.1，無強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)；12例非腫瘤膽道上皮組織中CXCL12陽(yáng)性表達(dá)率為16.7％，無強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。CXCL12蛋白在肝外膽管癌中的表達(dá)顯著高于膽道良性腫瘤和非腫瘤膽道上皮組織中的表達(dá)，(P<0.01)。

6、 2.2 肝外膽管癌中CXCR4免疫組化染色結(jié)果 CXCR4主要表達(dá)于肝外膽管癌細(xì)胞的胞漿和胞膜，細(xì)胞漿內(nèi)彌散狀分布。淋巴樣細(xì)胞同樣表達(dá)。82例肝外膽管癌組織中，CXCR4蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為75.6％，強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)率為8.5％；弱陽(yáng)性表達(dá)率為45.1％；7例膽道良性腫瘤中CXCR4陽(yáng)性表達(dá)率為28.6％，無強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)；12例非腫瘤膽道上皮組織中無CXCR4蛋白表達(dá)。CXCR4蛋白在肝外膽管癌中的表達(dá)高于膽道良性腫瘤和非腫瘤膽道上

7、皮組織中的表達(dá)，差異顯著(P<0.01)。 2.3 肝外膽管癌組織中CXCL12蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 CXCL12蛋白的表達(dá)與肝外膽管癌臨床進(jìn)展有相關(guān)的趨勢(shì)，II～I(xiàn)V期高于I期的表達(dá)(42.7％ vs 18.3％，P=0.068)。 2.4 肝外膽管癌組織中CXCR4蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 CXCR4蛋白的表達(dá)與肝外膽管癌臨床進(jìn)展有相關(guān)的趨勢(shì)，II～I(xiàn)V期高于I期的表達(dá)(22.4％VS

8、 7.3％，P=0.088)。 2.5 CXCL12表達(dá)對(duì)肝外膽管癌預(yù)后的影響 Kaplan-Meier生存曲線顯示，CXCL12高表達(dá)組中位生存時(shí)間27個(gè)月，低表達(dá)組中位生存時(shí)間24個(gè)月。單因素分析檢驗(yàn)表明，CXCL12高表達(dá)組與低表達(dá)組之間差異無顯著性(P>0.05)。 2.6 CXCR4表達(dá)對(duì)肝外膽管癌預(yù)后的影響 Kaplan-Meier生存曲線顯示，CXCR4高表達(dá)組中位生存時(shí)間27個(gè)月，低表達(dá)

9、組中位生存時(shí)間18個(gè)月。單因素分析檢驗(yàn)表明，CXCR4高表達(dá)組與低表達(dá)組之間差異無顯著性(P>0.05)。 2.7 CXCL12 mRNA在肝外膽管癌組織中的表達(dá) 肝外膽管癌組織中CXCL12 mRNA的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期密切相關(guān)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組相對(duì)表達(dá)量為0.32±0.4，明顯高于非轉(zhuǎn)移組(0.09±0.02，P<0.05)；II、III期病例CXCR4 mRNA的表達(dá)明顯高于I期病例(0.50±0.15 VS

10、 0.24±0.02，P<0.05)。CXCL12 mRNA在低分化組和高中分化組的相對(duì)表達(dá)量分別為0.23±0.09和0.10±0.01，無顯著差異(P>0.05)。 2.8 CXCR4 mRNA在肝外膽管癌組織中的表達(dá) 半定量RT-PCR結(jié)果分析表明，肝外膽管癌組織中CXCR4 mRNA的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期密切相關(guān)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和非轉(zhuǎn)移組的相對(duì)表達(dá)量分別為0.44±0.07和0.23±0.03，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組

11、明顯高于非轉(zhuǎn)移組(P<0.05)；II、III期病例CXCR4 mRNA的表達(dá)明顯高于I期病例(0.43±0.07 VS 0.25±0.08，P<0.05)。CXCR4 mRNA在不同分化程度病例中的表達(dá)無明顯差異(P>0.05)。 2.9 Western blot法檢測(cè)CXCR4在肝外膽管癌組織中的表達(dá) 采用圖像分析系統(tǒng)對(duì)雜交條帶進(jìn)行定量分析表明，CXCR4蛋白在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和非轉(zhuǎn)移組相對(duì)表達(dá)水平分別為0.28±0.

12、17和0.20±0.19，兩者無顯著差異(P>0.05)；CXCR4蛋白在低分化組和高中分化組之間及不同臨床分期病例間的表達(dá)水平均無明顯差異(P均>0.05)，提示肝外膽管癌組織中CXCR4在mRNA和蛋白水平上表達(dá)的意義有一定差異。 2.10 CXCL12與CXCR4在肝外膽管癌中表達(dá)的相關(guān)關(guān)系CXCL12與CXCR4之間無相關(guān)關(guān)系(r=0.095，P>0.05)；但是在II～I(xiàn)V期，CXCL12與CXCR4之間存在正相關(guān)關(guān)系(P=0

13、.05)。 3、 CXCL12-CXCR4對(duì)肝外膽管癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移以及淋巴管形成的影響 目的：探討VEGF-C、MMP-9表達(dá)對(duì)肝外膽管癌臨床進(jìn)展和預(yù)后的影響以及與CXCL12的相互關(guān)系。 方法：分別采用免疫組化和RT-PCR方法檢測(cè)VEGF-C和MMP-9在77例肝外膽管癌中的表達(dá)，分析了其臨床病理和預(yù)后意義。 4、 肝外膽管癌中CXCL12-CXCR4的表達(dá)與FOXP3+Treg細(xì)胞聚集的關(guān)系 目

14、的：探討FOXP3+Treg細(xì)胞聚集對(duì)肝外膽管癌臨床進(jìn)展和預(yù)后的影響以及其與相關(guān)基因表達(dá)的相互關(guān)系。 方法：采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)FOXP3+和COX-2蛋白在肝外膽管癌、膽道良性腫瘤和非腫瘤膽管上皮組織中的表達(dá)情況。 結(jié)論： 1.肝臟浸潤(rùn)、門脈或肝動(dòng)脈侵犯和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是EHCC根治切除影響預(yù)后的獨(dú)立因素。 2.根治性切除是提高EHCC遠(yuǎn)期生存率及改善生活質(zhì)量的關(guān)鍵，肝葉切除和(或)胰十二指腸切除聯(lián)合骨

15、骼化切除是提高根治切除率及遠(yuǎn)期療效的重點(diǎn)。 3.CXCL12和CXCR4的表達(dá)從非腫瘤膽管上皮組織、膽管良性腫瘤到肝外膽管癌有不斷增高的趨勢(shì)，提示它們可能參與了肝外膽管癌的發(fā)生。CXCL12和CXCR4的表達(dá)與肝外膽管癌的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。它們可能共同促進(jìn)肝外膽管癌的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移過程。 4.CXCL12表達(dá)與VEGF-C和MMP-9表達(dá)正相關(guān)。VEGF-C和MMP-9的表達(dá)從非腫瘤膽管上皮組織、膽管良性腫瘤到肝

16、外膽管癌不斷增高。VEGF-C和MMP-9的表達(dá)與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織分化密切相關(guān)，是影響肝外膽管癌進(jìn)展的重要因素，并且是肝外膽管癌的獨(dú)立影響因素。 5.FOXP3+Treg細(xì)胞聚集與肝外膽管癌中CXCL12和CXCR4的表達(dá)無關(guān)；COX-2蛋白表達(dá)與FOXP3+Treg細(xì)胞聚集之間存在明顯的正相關(guān)。 6.肝外膽管癌中存在著FOXP3+Treg細(xì)胞的浸潤(rùn)，其聚集的數(shù)目顯著高于非腫瘤膽管上皮組織和膽管良性腫瘤，但是，