阿魏酸鈉經(jīng)RhoA-Rho-kinase信號(hào)通路對(duì)肝硬化大鼠門脈壓力的作用及其機(jī)制.pdf

1、【背景及目的】門脈高壓是使肝硬化病人死亡風(fēng)險(xiǎn)增高的重要因素之一。實(shí)驗(yàn)性肝硬化大鼠肝臟中RhoA及Rho-kinase表達(dá)水平明顯高于正常大鼠,RhoA/Rho-kinase信號(hào)通道的激活導(dǎo)致血管平滑肌收縮并抑制其舒張,從而促進(jìn)了門脈高壓的發(fā)生。相關(guān)研究報(bào)道,阿魏酸能夠降低膽固醇合成,后者合成過程的中間產(chǎn)物GGPP是RhoA活化的關(guān)鍵物質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)旨在研究阿魏酸對(duì)肝硬化大鼠門脈壓力的作用,并探討相關(guān)分子機(jī)制。
　　【方法】用膽管結(jié)扎方

2、法制作肝硬化大鼠模型。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為SHAM+NS、BDL+NS及BDL+SF三組,比較分析各組大鼠大體特征及血清肝功能指標(biāo)。阿魏酸治療對(duì)肝臟纖維化程度的影響通過顯微鏡下觀察肝臟HE染色切片、透射電鏡觀察肝臟超微結(jié)構(gòu)改變,以及免疫組化檢測(cè)肝臟a-SMA表達(dá)等綜合評(píng)定。免疫組化方法檢測(cè)各組大鼠肝臟中RhoA、Rho-kinase及eNOS的表達(dá)。分離、培養(yǎng)原代大鼠HSC,另購(gòu)入人肝星狀細(xì)胞系LX-2,分別給予阿魏酸/阿魏酸+GGPP處理,流

3、式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各處理因素作用下細(xì)胞凋亡率。原位肝灌注方法測(cè)定大鼠原位肝灌注壓力/肝內(nèi)血管阻力,以及由低到高濃度梯度的甲氧明對(duì)各組大鼠肝灌注壓力/肝內(nèi)血管阻力的影響。
　　【結(jié)果】經(jīng)BDL術(shù)后肝硬化大鼠的體重顯著低于SHAM+NS組;其肝脾重及肝功能各項(xiàng)指標(biāo)(ALB除外)均顯著高于SHAM+NS組,而阿魏酸治療對(duì)肝硬化大鼠的上述指標(biāo)均無顯著影響(P>0.05)。病理觀察提示,阿魏酸治療組大鼠肝臟纖維化程度及肝細(xì)胞破壞程度較肝硬化組有所

4、減低。免疫組化檢測(cè)提示,肝硬化大鼠的肝臟a-SMA、RhoA、Rho-kinase及eNOS表達(dá)量均顯著高于SHAM+NS對(duì)照組。經(jīng)過阿魏酸治療后,肝硬化大鼠肝臟內(nèi)a-SMA、Rho-kinase表達(dá)量明顯減少(P<0.05vs.P<0.05);eNOS表達(dá)量增加(P<0.05);而對(duì)RhoA的表達(dá)量無明顯影響(P>0.05)。細(xì)胞學(xué)方面,LX-2及大鼠原代HSC細(xì)胞凋亡率隨著阿魏酸濃度的增加而升高(相鄰組間比較P<0.01);加入GG

5、PP后,SF濃度為40μg/ml組細(xì)胞凋亡率無顯著變化(P>0.05);SF濃度為120μg/ml及360μg/ml組細(xì)胞的凋亡率較加入GGPP前有所減低(P<0.05vs.P<0.05)。阿魏酸治療能夠降低肝硬化大鼠的基礎(chǔ)肝內(nèi)血管阻力(P<0.05),以及血管平滑肌對(duì)血管收縮劑(甲氧明)的敏感性(P<0.05)。
　　【結(jié)論】阿魏酸在組織病理水平上減低肝硬化大鼠的肝臟纖維化程度,并降低其門脈壓力。后者是通過下調(diào)RhoA/Rho-