回藥愛康方對小鼠Lewis肺癌細胞和人肺鱗癌SK-MES-1細胞bcl-2以及p53表達影響的實驗研究.pdf

1、目的：
　　通過中藥血清藥理學方法，探討回藥愛康方對小鼠Lewis肺癌細胞和人肺鱗癌SK-MES-1細胞的生長增殖、周期的影響以及對Bcl-2蛋白、突變型p53（mtp53）表達水平的影響。
　　方法：
　　將80只雄性SD大鼠隨機分為8組，每組10只，分別為：對照組（NS），回藥愛康方低、中、高劑量（AKRL、AKRM、AKRH）組，環(huán)磷酰胺（CTX）組，回藥愛康方低、中、高劑量聯(lián)合環(huán)磷酰胺（AKRL/AKRM/AK

2、RH+CTX）組。分別給予相應回藥愛康方低、中、高劑量濃縮水煎劑灌胃，連續(xù)5天；CTX組和聯(lián)合組再按20mg/kg給予環(huán)磷酰胺于第1、3、5天腹腔注射，NS組給予等量生理鹽水，制備含藥血清。體外培養(yǎng)小鼠Lewis肺癌細胞和人肺鱗癌SK-MES-1細胞，取對數(shù)生長期的細胞用于實驗。倒置顯微鏡下觀察各組細胞的形態(tài)學變化，應用MTT法檢測各組含藥血清對小鼠Lewis肺癌細胞和人肺鱗癌SK-MES-1細胞增殖的影響，流式細胞儀進行細胞周期時相分

3、析，免疫細胞化學法檢測細胞bcl-2以及p53蛋白的表達。
　　結果：
　　1.細胞形態(tài)的改變在倒置顯微鏡下觀察各組細胞的形態(tài)，正常的Lewis細胞和SK-MES-1細胞貼壁生長良好，細胞邊界清楚，胞漿勻實?；厮帎劭捣胶幯甯深A各組細胞后，Lewis細胞出現(xiàn)細胞皺縮、體積變小以及脫落現(xiàn)象；SK-MES-1細胞也不同程度的出現(xiàn)細胞膜回縮、胞核的空泡樣改變、細胞膜的破裂及細胞的壞死脫落。隨著血清濃度的增加，干預時間的延長，和A

4、KR組、CTX組相比較，AKR聯(lián)合組的細胞形態(tài)變化更加明顯?；厮帎劭捣胶幯鍧舛冗_到20％且干預細胞72h后，AKRH+CTX組細胞數(shù)量明顯減少，細胞形態(tài)的改變尤為明顯。
　　2.細胞增殖的影響和NS組比較，回藥愛康方含藥血清作用不同時間對Lewis細胞和SK-MES-1細胞生長增殖有抑制作用（p<0.05），回藥愛康方高劑量聯(lián)合CTX組的抑制率明顯高于其他組，抑制程度呈時間和濃度依賴性。20%濃度的回藥愛康方含藥血清干預Lew

5、is細胞和SK-MES-1細胞72h后AKRH+CTX組的抑制率分別達到了64.1%和42.3%。
　　3.細胞周期的影響5%、10%和20%濃度的含藥血清作用于Lewis細胞和SK-MES-1細胞24h、48h、72h后，和NS組相比，各實驗組G0/G1期細胞比例逐漸增多，而S期細胞比例逐漸減少（p<0.05）。20%濃度含藥血清干預細胞72h后，各實驗組G0/G1期細胞比例多于5%、10%濃度含藥血清組，S期細胞比例則較之減少

6、，AKRH+CTX組表現(xiàn)最為明顯。
　　4.Bcl-2以及p53蛋白表達的影響在不同濃度的含藥血清作用下，和NS組相比，各實驗組細胞的IOD值逐漸減小，差異有統(tǒng)計學意義（p<0.05）；20%濃度的含藥血清各實驗組IOD值低于5%、10%濃度的含藥血清組（p<0.05）。分別干預細胞24h、48h、72h后，與NS組比較，各實驗組細胞的IOD值逐漸減?。╬<0.05）；20%濃度含藥血清干預細胞72h，各實驗組的陽性表達逐漸減弱，

7、IOD值較低（p<0.05），AKRH+CTX組細胞的抑制率最高，故陽性表達最弱，IOD值最低。
　　結論：
　　1.回藥愛康方能夠抑制小鼠Lewis肺癌細胞和人肺鱗癌SK-MES-1細胞的生長增殖，同時與CTX有協(xié)同作用；
　　2.回藥愛康方聯(lián)合CTX能增強對肺癌細胞增殖周期的抑制，影響細胞DNA合成、復制，使細胞阻滯在G0/G1期，同時減少細胞進入S期，從而起到抑制腫瘤細胞增殖的作用。
　　3.回藥愛康方可以