內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在柯薩奇病毒B3誘導的急性病毒性心肌炎中的作用及機制研究.pdf

1、背景:
　　急性病毒性心肌炎(Acute viral myocarditis，AVMC)為病毒感染引起的心肌局灶性或彌散性免疫性炎癥病變。臨床上以腸道病毒柯薩奇病毒B3(coxsackievirusB3，CVB3)感染引起的心肌炎最為多見。臨床觀察發(fā)現(xiàn)柯薩奇病毒B3的病毒量、復制速率和存在時間與心肌損傷和疾病進展直接相關(guān)，但具體機制尚未闡明。研究表明內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(Endoplasmic reticulum stress， ER st

2、ress)及其下游促凋亡分子C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein，CHOP)在許多病毒感染性疾病中發(fā)揮重要作用，其與病毒感染引起的宿主細胞凋亡有關(guān)，但內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是否參與了急性病毒性心肌炎的發(fā)生和發(fā)展及其相關(guān)作用機制尚未明確。
　　方法:
　　本研究應(yīng)用柯薩奇病毒B3腹腔接種法建立急性病毒性心肌炎小鼠模型，并使用內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激保護劑熊去氧膽酸(tauroursodeoxycholic acid，TU

3、DCA)灌胃來研究內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在急性病毒性心肌炎中的作用，通過心臟超聲和血流動力學檢測評價心功能改變，接種病毒7天后收集小鼠心臟組織和血標本。應(yīng)用免疫組織化學染色（Immunological Histological Chemistry，IHC），western blot蛋白印記法，酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA），TUNEL染色等方法檢測心臟炎癥反應(yīng)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激水平、心肌損

4、傷和心肌細胞凋亡（apoptosis）等情況。
　　結(jié)果:
　　生存分析提示急性病毒性心肌炎組小鼠存活率顯著低于對照組（P＜0.05）。心臟超聲和血流動力學檢測結(jié)果提示，急性病毒性心肌炎組左室射血分數(shù)、短軸縮短率、dP/dt最大值、dP/dt最小值和左室收縮末壓等心功能參數(shù)均顯著低于對照組（P值均＜0.01），而左室舒張末壓顯著高于對照組(P＜0.01)。Western blot檢測進一步提示急性病毒性心肌炎組小鼠心功能顯著

5、降低，其心衰標志物心房鈉尿肽的蛋白表達水平顯著高于對照組(P＜0.01)。ELISA檢測提示急性病毒性心肌炎組存在心肌損傷，其血清心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cardiac troponinⅠ，cTnⅠ)水平顯著高于對照組(P＜0.01)。組織學染色顯示急性病毒性心肌炎組小鼠心肌組織可見明顯的心肌細胞變性壞死和間質(zhì)炎癥細胞浸潤，而對照組未見異常改變;急性病毒性心肌炎組心臟組織病理學評分和巨噬細胞浸潤程度（表面標記F4/80）均顯著高于對照組（P值均

6、＜0.01）。急性病毒性心肌炎組心臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激水平顯著提高，免疫組化染色結(jié)果提示急性病毒性心肌炎組內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標志物KDEL的蛋白表達水平顯著高于對照組(P＜0.01)，western blot檢測進一步提示急性病毒性心肌炎組內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激感受蛋白p-PERK、p-IRE1α和ATF6的蛋白表達水平均顯著高于對照組(P值均＜0.01)。TUNEL染色提示急性病毒性心肌炎組心肌細胞凋亡比例顯著高于對照組(P＜0.01)。Western blot

7、檢測提示急性病毒性心肌炎組心臟CHOP的蛋白表達水平顯著高于對照組（P＜0.01），并且CHOP蛋白的上調(diào)與抗凋亡蛋白Bcl-2的降低以及促凋亡蛋白Bax和caspase3的上調(diào)存在相關(guān)性。而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激保護劑TUDCA的應(yīng)用顯著降低CVB3感染后心肌組織的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激水平和炎癥反應(yīng)水平、減輕心肌損傷、改善心臟功能并增加存活率;同時，TUDCA的應(yīng)用顯著降低心臟CHOP、caspase3和Bax蛋白表達、提高Bcl-2蛋白表達并減少心肌細胞