藏紅花素對(duì)急性白血病患兒骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及功能的影響.pdf

1、目的：
　　 研究化療及不同濃度藏紅花素對(duì)急性白血病患兒骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)增殖及功能的影響。
　　 方法：
　　 收集正常兒童，新發(fā)急性白血病患兒，化療6個(gè)月及化療1年后的急性白血病患兒骨髓各10例，全骨髓法培養(yǎng)出BMSCs，分別設(shè)為正常對(duì)照組(A)，實(shí)驗(yàn)組分為新發(fā)組(B)，化療6月組(C)及化療12月組(D)，并通過流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞表面標(biāo)記分子CD44、CD105、CD29、CD73、CD34、C

2、D45及HLA-DR的表達(dá)率，進(jìn)行BMSCs鑒定。用含不同濃度藏紅花素(0、0.3125 mg/ml、0.625 mg/ml、1.25 mg/ml及2.5mg/ml)的低糖DMEM(L-DMEM)培養(yǎng)液分別培養(yǎng)各組BMSCs48h、72h及96h。倒置顯微鏡觀察各組BMSCs形態(tài)及增殖情況;MTT法檢測經(jīng)不同濃度藏紅花素、不同時(shí)間作用后的各組BMSCs增殖率;ELISA法測定作用96小時(shí)后各組細(xì)胞上清液干細(xì)胞因子(SCF)及腫瘤壞死因子

3、-α(TNF-α)的水平。
　　 結(jié)果：
　　 1.BMSCs膜抗原表達(dá):各組均有99.5％以上細(xì)胞表面表達(dá)CD44、CD105、CD29及CD73，而表達(dá)CD34、CD45及HLA-DR的細(xì)胞均低于2％。
　　 2.BMSCs形態(tài)學(xué)變化:A組BMSCs形態(tài)規(guī)則，呈集落樣或“結(jié)網(wǎng)樣”迅速增殖，B組BMSCs形態(tài)較規(guī)則，但增殖速度明顯低于正常對(duì)照組;C及D組BMSCs形態(tài)不規(guī)則，增殖速度明顯低于A組。
　　

4、 3.BMSCs增殖活性:實(shí)驗(yàn)各組BMSCs在藏紅花素作用前培養(yǎng)48h、72h、96h后所測得OD值均低于A組OD值，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)，培養(yǎng)72h及96h后，D組OD值明顯低于C組OD值，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，(p＜0.05);加入不同濃度藏紅花素培養(yǎng)96h后，BMSCs增殖率均明顯提高(F值分別為19.85、5.42、9.31、9.58; p＜0.05)，當(dāng)藏紅花濃度從0.3125mg/ml-1.25mg/ml時(shí)，增殖率逐

5、漸增加，以藏紅花素濃度為1.25mg/ml時(shí)的增殖率最高，與其他各組比較均有顯著性差異(p＜0.05)，當(dāng)藏紅花素濃度升高至2.5mg/ml時(shí)，各組細(xì)胞增殖率反而下降。
　　 4.BMSCs產(chǎn)生SCF及TNF-α水平:B組細(xì)胞產(chǎn)生SCF及TNF-α水平較A明顯升高(p＜0.05)，C及D組明顯低于B組（p均＜0.05），D組明顯低于C組(p＜0.05)，但C組TNF-α水平仍顯著高于A組(p＜0.05)。藏紅花素作用后，A組細(xì)胞

6、上清液中SCF水平明顯下降(F=25.49;p＜0.05)，以1.25mg/ml濃度組最低;C及D組經(jīng)藏紅花素作用后，上清液SCF水平明顯升高(F=4.69，17.46;p＜0.05)，以1.25mg/ml組最高，而A及C組經(jīng)濃度為0.625mg/ml及1.25mg/ml藏紅花素作用后，上清液中TNF-α水平明顯下降(F=5.58，6.12; p＜0.05)，亦以1.25mg/ml濃度組下降最明顯。
　　 結(jié)論：
　　

7、1.急性白血病患兒治療前BMSCs的形態(tài)及細(xì)胞表型與正常BMSCs無明顯差異，但其增殖活性明顯降低，產(chǎn)生SCF及TNF-α水平異常增高，提示急性白血病患兒骨髓發(fā)生了造血微環(huán)境的紊亂。
　　 2.化療6月后急性白血病患兒BMSCs貼壁較前緩慢，形態(tài)不規(guī)則，增殖活性及產(chǎn)生SCF及TNF-α水平均明顯降低，提示化療可損傷BMSCs的形態(tài)、增殖活性及功能。
　　 3.化療12月后急性白血病患兒BMSCs增殖活性及產(chǎn)生SCF及TN

8、F-α水平均較化療6月后明顯減低，提示化療強(qiáng)度越大，對(duì)BMSCs的損傷越明顯。
　　 4.治療前急性白血病患兒BMSCs經(jīng)藏紅花素作用后，增殖活性無明顯改變，但產(chǎn)生SCF及TNF-α水平較前明顯降低，提示藏紅花素可調(diào)節(jié)急性白血病患兒造血微環(huán)境紊亂。
　　 5.化療6月后急性白血病患兒BMSCs經(jīng)藏紅花素作用后產(chǎn)生TNF-α的水平明顯降低，提示藏紅花素可減輕造血抑制。
　　 6.化療6月及12月后急性白血病患兒BM