單純肥胖癥胃組織micRNA表達分析.pdf

1、研究背景:肥胖及其相關(guān)伴發(fā)癥已成為世界性健康問題，它和環(huán)境、遺傳、行為及心理等多因素有關(guān)。近年來對肥胖基礎研究已深入分子水平，其中Mi croRNA(miRNA)在肥胖過程中的相關(guān)作用受到廣泛重視。miRNA是一類長度約22nt內(nèi)源性非編碼功能性RNA，通過與靶mRNA的特定序列完全或不完全互補結(jié)合，誘導靶mRNA降解或者阻止其翻譯。目前相關(guān)研究表明miRNA在肥胖過程中脂肪細胞分化、脂質(zhì)代謝、胰島素抵抗等環(huán)節(jié)起到重要調(diào)節(jié)作用，并與Gh

2、relin、Leptin等激素水平相關(guān)。因此以miRNA作為新的切入點，為肥胖癥病因、預測及基因治療等研究開辟了新的途徑。
　　 目的:檢測肥胖癥患者胃組織miRNA表達譜，篩選并驗證其與健康者差異表達的miRNAs，探尋可能與肥胖相關(guān)的miRNAs。
　　 方法:應用微陣列芯片技術(shù)篩選出肥胖組胃組織中差異表達的micRNA，并從中選擇miR-126、miR-141、miR-194、miR-99a、miR-200a進一步

3、行定量PCR驗證。收集8例行腹腔鏡袖套式胃大部切除術(shù)治療的肥胖癥患者(BMI＞30 kg/m2)及8例行胃鏡檢查的健康志愿者(BMI＜30 kg/m2)胃組織標本。按照Agilent's miRNAComplete Labeling and Hyb Kit(Agilent Technologies,Inc.2010,Version2.3)試劑盒說明進行標記及芯片雜交，雜交結(jié)束后用Agilent G2505C微陣列芯片掃描儀進行掃描。用T

4、arget Scan Release4.2 algorithm法預測差異表達micRNA的靶基因。
　　 在芯片掃描基礎上，選擇miR-126、miR-141、miR-194、miR-99a、miR-200a行定量PCR驗證。提取上述8例肥胖癥患者及8例健康志愿者胃組織標本miRNA，按miScriptⅡ Reverse Transcription Kit(購自Qiagen公司)合成cDNA，用LC480Ⅱ型熒光定量PCR儀進行

5、實時定量RT-PCR，所得數(shù)據(jù)采用2-△△Ct法進行分析。
　　 結(jié)果:微陣列芯片結(jié)果顯示:與正常胃組織相比，肥胖者胃組織異常表達(FC＞2,P＜0.05)的miRNA總共有203個，其中上調(diào)128個，下調(diào)75個。有18個micRNA與BMI呈相關(guān)關(guān)系（miR-222、194、192、200c、215、126、501-3p、451、665、126*、625、UL70-3p、648、452、K12-3、223、1260與之呈正相關(guān)

6、，140-3p、33b*與之呈負相關(guān)）。
　　 熒光定量PCR結(jié)果顯示:肥胖組胃組織中5個miRNA相對表達顯著低于非肥胖組值，其2-△△Ct值分別為miR-126(0.1120)、miR-141(0.0135)、miR-194(0.0016)、miR-99a(0.3697)、miR-200a(0.0038)。其中miR-141、miR-194、miR-200a結(jié)果具有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)論:
　　 1、肥胖癥

7、患者胃組織miRNA表達發(fā)生顯著改變。與非肥胖組相比，表達上調(diào)大于2.0倍的miRNAs有128個，下調(diào)大于2.0倍的miRNAs有75個。其中19個micRNA與BMI呈相關(guān)關(guān)系（miR-222、194、192、200c、215、126、501-3p、451、665、126*、625、UL70-3p、648、452、K12-3、223、1260呈正相關(guān)，140-3p、33b*呈負相關(guān)）。
　　 2、肥胖癥胃組織中miR-141