Cromer、Knops、Indian血型系統(tǒng)基因多態(tài)性及蛋白功能研究.pdf

1、Cromer、Knops和Indian血型系統(tǒng)分別是國際輸血協(xié)會(huì)(ISBT)命名的第21、22和23號(hào)血型系統(tǒng)。國外研究機(jī)構(gòu)對(duì)這三種血型系統(tǒng)的研究在不斷深入，而我國還未見對(duì)這三種血型系統(tǒng)在中國人群中的調(diào)查報(bào)道。本文的首要目的在于建立針對(duì)Cromer、Knops、Indian血型系統(tǒng)基因檢測方法，研究中國人群中三種血型系統(tǒng)基因多態(tài)性情況。另外，Cromer血型蛋白DAF(CD55)和Knops血型蛋白CRl(CD35)同屬于補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白（

2、Complement Regulatory Proteins，CRPs）家族，此家族還包括CD59。人體內(nèi)每天大約有1％紅細(xì)胞因老化而被清除，針對(duì)老化紅細(xì)胞觸發(fā)巨噬細(xì)胞識(shí)別和清除的機(jī)制有多種理論。本文的另一目的是通過檢測不同老化程度紅細(xì)胞表面CD55、CD35和CD59數(shù)量，老化紅細(xì)胞清除機(jī)制中調(diào)理性吞噬機(jī)制是否發(fā)揮重要作用。
　　 我們首先采用基因組測序結(jié)合序列特異性引物聚合酶鏈反應(yīng)( polymeraseschain rea

3、ction- sequence-specific primer, PCR-SSP)的方法在漢族、維吾爾族、土族、傈僳族和侗族中對(duì)Cromer、Knops和Indian三個(gè)血型系統(tǒng)進(jìn)行基因篩查。結(jié)果對(duì)于Cromer血型系統(tǒng)和Indian血型系統(tǒng)僅在內(nèi)含子處發(fā)現(xiàn)了兩個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，而在Knops血型系統(tǒng)的第29外顯子區(qū)域檢出了2個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)(A4646G和A4870G)，并計(jì)算出了其對(duì)應(yīng)在5個(gè)民族人群中的基因頻率，發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)位點(diǎn)的基因頻率在不

4、同民族間的分布存在差異。之后我們又對(duì)Knops血型基因的全長cDNA進(jìn)行了測序，以期發(fā)現(xiàn)新的多態(tài)性位點(diǎn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)中國人的CR1基因編碼區(qū)域存在已經(jīng)報(bào)道的12個(gè)單核苷酸多態(tài)性(Single NucleotidePolymorphisms，SNPs)。
　　 我們還利用毛細(xì)管分離將紅細(xì)胞(RBC)分為年輕RBC和年老RBC，并對(duì)RBC體外40C及370C保存一周進(jìn)行體外老他。借助流式細(xì)胞術(shù)，檢測了紅細(xì)胞表面的CD35、CD55和CD

5、59數(shù)量，以及所吸附的自身抗體IgG的數(shù)量。另通過體外培養(yǎng)人單核細(xì)胞白血病(THP-1)細(xì)胞，對(duì)紅細(xì)胞進(jìn)行吞噬。與毛細(xì)管分離的年輕紅細(xì)胞相比，年老紅細(xì)胞表面三種補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白數(shù)量顯著下降，自身抗體IgG敏感性顯著增加。體外40C保存的紅細(xì)胞表面三種補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白數(shù)量無顯著變化，370C保存的紅細(xì)胞表面數(shù)量CD55和CD59數(shù)量顯著降低，但自身抗體IgG結(jié)合量都無明顯變化。THP-1細(xì)胞對(duì)年老紅細(xì)胞表現(xiàn)出輕微吞噬，對(duì)年輕紅細(xì)胞不吞噬。

6、　　 總體上，本實(shí)驗(yàn)一方面在沒有相應(yīng)抗體和中國人群相關(guān)數(shù)據(jù)的情況下，分析了三個(gè)稀有血型系統(tǒng)在中國漢族及幾個(gè)少數(shù)民族中的分布情況，建立了快速篩查Knops血型基因的PCR-SSP方法。另一方面，眾多關(guān)于紅細(xì)胞老化吞噬的研究中，多數(shù)針對(duì)自身抗體和關(guān)于非調(diào)理性吞噬的CD47，鮮見系統(tǒng)針對(duì)補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白的研究。另外，還將毛細(xì)管離心和體外儲(chǔ)存的紅細(xì)胞，進(jìn)行了比較，這也是本文的另一創(chuàng)新之處。
　　 紅細(xì)胞作為人體內(nèi)一種特殊的無核細(xì)胞，它的衰