VEGF、b-FGF誘導(dǎo)的人外周血單個(gè)核細(xì)胞向血管內(nèi)皮祖細(xì)胞分化的研究.pdf

1、目的:研究在VEGF、b-FGF誘導(dǎo)下人外周血單個(gè)核細(xì)胞向血管內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)分化的方法。 方法:采集健康志愿者外周血，經(jīng)Ficoll密度梯度離心法獲取單個(gè)核細(xì)胞，在加有VEGF、bFGF的M199培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)第7d，進(jìn)行流式細(xì)胞學(xué)及免疫組化(SABC法)和免疫熒光檢測細(xì)胞表面抗原的表達(dá)。 結(jié)果: 1.被分離的外周血單個(gè)核細(xì)胞在培養(yǎng)48h后出現(xiàn)貼壁，在第4～5d時(shí)生長最快，大約在培養(yǎng)第5d出現(xiàn)大量的梭

2、形細(xì)胞。單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)5d后，鏡下可見大量的細(xì)胞團(tuán)形成。大約在培養(yǎng)第6d，可見長梭形細(xì)胞以細(xì)胞團(tuán)為中心呈放射狀生長。培養(yǎng)第7d，可見由多個(gè)長梭形細(xì)胞首尾相連形成條帶樣排列，有時(shí)還可見到兩排細(xì)胞平行排列呈管樣結(jié)構(gòu)。 2.為了觀察貼壁細(xì)胞是否具有內(nèi)皮祖細(xì)胞的表型，進(jìn)行了KDR、CD133和CD34等表面標(biāo)記物的免疫熒光及免疫組化檢測，免疫組化結(jié)果顯示CD34、KDR呈陽性染色。免疫熒光結(jié)果顯示細(xì)胞CD133陽性染色，熒光顯微鏡下細(xì)胞

3、膜和胞漿中可見黃綠色熒光。 結(jié)論: 1.外周血中分離培養(yǎng)出EPCs，并且證明EPCs也參與了出生后的血管生成?？梢酝ㄟ^動(dòng)員、體外擴(kuò)增、移植EPCs來促進(jìn)新生血管的形成。 2.CD133選擇性地在骨髓和外周血造血干細(xì)胞及內(nèi)皮祖細(xì)胞表達(dá)，但在成熟內(nèi)皮細(xì)胞上不表達(dá)。采用CD133分選可排除血管壁脫落的成熟內(nèi)皮細(xì)胞。 3.研究中新鮮CD34+單個(gè)核細(xì)胞基本不表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞的特異性分子標(biāo)志，而培養(yǎng)7d后成熟內(nèi)皮細(xì)胞的